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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr阴性对照与目的条带大小一致
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rancase04

木虫 (正式写手)

[求助] pcr阴性对照与目的条带大小一致已有1人参与

pcr产物的阴性对照与目的条带大小一致，这个引物是不是有问题？？
引物序列：5#-CAATGGGACCAAACCCAGAGTTC-3#and 5#-AGCAAAAGGCTGCTTGGAAAC-3#;
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1楼2011-12-07 09:59:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！whs 2011-12-07 11:42:15
rancase04(金币+3): 2011-12-26 20:40:57
和引物没有关系。可能有两个原因：
1.PCR的东西污染有DNA
2.目的片段没有扩增出来，你看到大小一致的是引物二聚体。
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2楼2011-12-07 11:30:52
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普通回帖

c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 有可能哦 2011-12-08 18:56:57
rancase04(金币+3): 2011-12-26 20:41:22
如果出来的条带在100左右就可能是引物二聚体哦，如果不是那就是你的对照污染了
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3楼2011-12-07 11:52:59
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咖啡加点糖

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-07 19:20:29
rancase04(金币+3): 2011-12-26 20:41:13
也不能说是污染，我做PCR有一次就是阴性P出条带来了，后来以为是污染就将所有的试剂都换成新的，但是阴性还是会有条带，实验组的条带亮度比对照的亮很多，后来查了一下有的说是冒液，不晓得对不对，望大虾们指点！
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4楼2011-12-07 12:32:09
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rancase04

木虫 (正式写手)
1949stone: 上图就好了 2011-12-09 01:06:33
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangbin1 at 2011-12-07 11:30:52:
和引物没有关系。可能有两个原因：
1.PCR的东西污染有DNA
2.目的片段没有扩增出来，你看到大小一致的是引物二聚体。

我做的其他基因阴性对照是没有条带的   目的基因片段为150 bp，隐形对照出来的也是那么大

每一部分的第四个泳道为阴性对照，
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5楼2011-12-07 13:40:36
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

rancase04(金币+1): 2011-12-26 20:41:37
引用回帖:
5楼: Originally posted by rancase04 at 2011-12-07 13:40:36:
我做的其他基因阴性对照是没有条带的   目的基因片段为150 bp，隐形对照出来的也是那么大

每一部分的第四个泳道为阴性对照，

我也有的，楼主解决了告诉一声
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6楼2011-12-07 18:09:57
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): Good！ 2011-12-08 18:57:22
rancase04(金币+1): 2011-12-26 20:41:44
引用回帖:
6楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-12-07 18:09:57:
我也有的，楼主解决了告诉一声

楼主的引物以前扩增过质粒序列吗？还有可能是气溶胶污染。
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jiayoubashaonian
7楼2011-12-07 18:38:15
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

rancase04(金币+1): 2011-12-26 20:41:51
我也经常遇到过阴性对照有条带，只不过是比目的条带亮度小了一点，都想拿去测序看看p出来的是个什么东东。楼主要是解决了通知我呀 感激不尽
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8楼2011-12-08 08:27:41
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julietguo

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流~后面解决了没啊？ 2011-12-08 18:57:40
rancase04(金币+3): 2011-12-26 20:41:58
我们实验室也会出现这样的问题,可能是dNTP、buffer或者水污染了吧，建议你分装了再用
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9楼2011-12-08 14:26:50
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rancase04

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by julietguo at 2011-12-08 14:26:50:
我们实验室也会出现这样的问题,可能是dNTP、buffer或者水污染了吧，建议你分装了再用

同样的药品在其他基因上做 没有出现这种问题  只有这个基因是这个样子的
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10楼2011-12-08 15:03:27
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