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fengzheng770铜虫 (初入文坛)
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[求助]
关于转化、菌落PCR
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大家好，有个问题向大家求助。 最近做实验遇到的问题：将某基因和真核表达载体连接，然后转化DH5α，涂含合适抗生素的培养皿，第二天长出一些菌落，挑单菌落划板，同时菌落PCR（用的之前扩增基因的上下游引物），挑选菌落PCR阳性的克隆，接种到含有合适的抗生素的LB中摇菌过夜，第二天，菌液浑浊，然后提质粒，双酶切鉴定，竟然没有条带，用提出的质粒电泳，也没有任何条带。如果是假阳性的话（引物用扩增基因的引物容易假阳性），为什么在含有抗生素的LB培养基中摇菌能长出很多菌来？如果是真阳性克隆，为什么又没有质粒？而且确定双酶切用的酶是没有问题的。 |
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