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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 5'RACE 菌落PCR
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纳兰欣光

新虫 (初入文坛)

[求助] 5'RACE 菌落PCR

最近做5‘RACE ，inner  PCR跑出两条带，一条1000多的，一条100多的，1000多bp的为目的片段，可是切胶回收后转化连接，菌落PCR没有1000多的带，只有100的带，想问一下有经验的前辈们什么原因啊？图1是inner  PCR，图2是菌落PCR
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1楼 2011-10-12 17:18:48
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madengyu

禁虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): good 2011-10-17 17:11:30
纳兰欣光(金币+2): 2011-11-02 18:41:28
本帖内容被屏蔽
2楼2011-10-12 18:52:32
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hc1027

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by madengyu at 2011-10-12 18:52:32:
图2是引物二聚体吧！我是用菌液做的PCR，效果很好。

产生楼主那样引物二聚体的原因是什么呢？我以前也遇到过
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3楼2011-10-17 10:17:21
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是引物二聚体，我每次做都会有一点，但是不会这么亮，可能是切胶回收率太低，可以试试用PCR产物纯化。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
4楼2011-10-23 18:49:40
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wxq999

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

西瓜:编辑内容 2011-10-24 17:51
-------------广告内容-----------------
该虫多次发布广告，为了避免版主刷管理记录的嫌疑，不再每个帖子单独扣分，而是分几次重罚。请自重，勿扰乱论坛的正常交流！

[ Last edited by 西瓜 on 2011-10-24 at 17:51 ]
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5楼2011-10-24 17:04:48
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很大可能性是你所得到的clony都是空载体

因为你的sample太少  不足以说明其他问题
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Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
6楼2011-10-31 16:53:53
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李春晓科研

新虫 (初入文坛)
图2条带应该是引物二聚体，你没P出来。调整一下反应程序或者可能就是没转进去的假阳性。
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7楼2011-11-20 14:38:50
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匿名

用户注销 (小有名气)
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8楼2014-03-06 23:25:06
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