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纳兰欣光

新虫 (初入文坛)

[求助] 5'RACE 菌落PCR

最近做5‘RACE ,inner  PCR跑出两条带,一条1000多的,一条100多的,1000多bp的为目的片段,可是切胶回收后转化连接,菌落PCR没有1000多的带,只有100的带,想问一下有经验的前辈们什么原因啊?图1是inner  PCR,图2是菌落PCR



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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很大可能性是你所得到的clony都是空载体

因为你的sample太少  不足以说明其他问题
Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
6楼2011-10-31 16:53:53
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查看全部 8 个回答

madengyu

禁虫 (小有名气)


西瓜(金币+1): good 2011-10-17 17:11:30
纳兰欣光(金币+2): 2011-11-02 18:41:28
本帖内容被屏蔽

2楼2011-10-12 18:52:32
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hc1027

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by madengyu at 2011-10-12 18:52:32:
图2是引物二聚体吧!我是用菌液做的PCR,效果很好。

产生楼主那样引物二聚体的原因是什么呢?我以前也遇到过
3楼2011-10-17 10:17:21
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是引物二聚体,我每次做都会有一点,但是不会这么亮,可能是切胶回收率太低,可以试试用PCR产物纯化。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
4楼2011-10-23 18:49:40
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