| 查看: 3656 | 回复: 19 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
求帮忙分析下菌液PCR检测结果
|
||||
|
各位同志，图是我挑选单克隆之后菌液PCR的结果，上半部分为一个基因大小2168bp，下半部分基因大小1527bp。从图上看，只有基因2只有2.5可能有目的条带，基因6中6.2.1-6.2.5均有1500bp左右片段，但亮度不够。最近的单克隆经常出现这种情况，要么亮度不够，要么不是目的条带，请各位大侠帮忙分析下出现这种情况的原因及可能的解决办法，不胜感激。 ps：连接的目的基因是通过PCR扩增、切胶回收得到，连接前电泳检测过，条带单一。  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 科研资源 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有72人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 菌液PCR验证又失败了
已经有15人回复
- 菌液PCR验证
已经有8人回复
- 根据已知序列，从相同菌种(菌株编号不同)中能PCR出目的基因吗？
已经有6人回复
- 菌液pcr检测不对
已经有7人回复
- 农杆菌菌液PCR没有结果
已经有10人回复
- 大家帮忙分析一下PCR电泳图
已经有14人回复
- 【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR结果，谢谢！
已经有27人回复
- 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现非特异性条带
已经有8人回复
- 【求助/交流】菌液PCR问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现CK
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于农杆菌菌液PCR
已经有13人回复
- 【求助/交流】菌液PCR结束，肉眼直接看到条带可能不？
已经有15人回复
- 【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR-DGGE的图
已经有16人回复
- 【求助/交流】有关菌液PCR的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因
已经有12人回复
- 【求助/交流】菌液PCR和酶切的结果不符
已经有18人回复
3楼2011-10-08 21:12:01
2楼2011-10-08 20:48:03
5楼2011-10-08 21:55:48
bioartist
木虫 (正式写手)
无菌草莓
- MolEPI: 3
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2012.9
- 红花: 4
- 帖子: 611
- 在线: 105.2小时
- 虫号: 419482
- 注册: 2007-07-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 鼓励，可以开专贴，单独讨论下，集思广益 2011-10-09 07:58:13
faile18(金币+10): 2011-10-09 21:22:56
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 鼓励，可以开专贴，单独讨论下，集思广益 2011-10-09 07:58:13
faile18(金币+10): 2011-10-09 21:22:56
|
我之前探讨过类似的问题了，今天在小议一下： 1. 楼主的问题说的不是很清楚。用的是什么载体？菌液PCR是如何选用引物的？退火温度是怎么选择的？ 这种电泳结果说明，你的引物特异性不是很高，引物可能在转化菌株的基因组上又结合位点。上面那个图中，有你要的目的条带，但是有些条带不是很清楚，原因可能很多，如模板量、DNA聚合酶用量的差异的等。这个可以不用管，这个实验是有和无的关系，可以选三个有目的带的样品测序，最终结果是以测序为准的，菌体PCR只是初步筛选的过程。 2. 感觉是你引物选用的不对。我们常用的载体上都用通用的测序引物（如如M13F、M13R、T7、Sp6等，若真没有，可以自行设计一条20bp左右的引物），可以和你目的片段的一条引物配对，这个可以以没有外源片段的载体作对照，这样获得的结果可行对比较高。不能直接用扩增你目的片段的方法，没有说服力； 3. 菌体电泳，直接用碱裂解法的溶液I和溶液II裂解菌体后，进行电泳，以没有外源片段的载体作对照，条带相对滞后样品就是应该是连入外源片段的。 4. 可以酶切载体，再以没有连接外源片段载体的酶切产物作对照。这个方法比较麻烦，不推荐。 通过这几种方法筛选到的阳性克隆，直接以菌体送去测序公司测序分析。你所要的阳性克隆，最终还是要通过测序结果的序列分析确定。 |
6楼2011-10-08 22:03:39
投票: