应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌液PCR和酶切的结果不符
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
191/2返回列表12下一页
查看: 1759  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liuwei78

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR和酶切的结果不符 已有11人参与

我实验用到的载体片段长3000多，目的基因片段长2000多。导入大肠杆菌后菌液PCR得到的条带和预期一致，但是单酶切以后得到的条带却只有2000多bp。已经检查过了片段上应该只有一个酶切位点，那么为啥会出现这种情况呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-04-22 11:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
是不是电泳没跑开？3000和2000要分开可是低电压得跑稀的长胶
赞一下 回复此楼
2楼2010-04-22 13:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-22 14:43
第一：PCR可能是假阳性结果
第二：检验酶切体系是否有问题，应该做个对照，最好是单双酶切一起做~~
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-04-22 13:28:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)
还有你的载体上是否也有这个酶切位点呢~~
赞一下 回复此楼
4楼2010-04-22 13:29:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaiyf

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 2010-04-22 18:18
还有一种情况就是由于目的基因片段过长，所以在连接的时候可能会出现错误，或者没有连接上。
赞一下(2人) 回复此楼
多看文献，多学知识
5楼2010-04-22 16:34:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)
把电泳跑开一点看一下
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-22 16:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jlzkchong

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能你的目的片段在前期PCR的时候就出现了突变，酶切位点与原来不一样了，建议用高保真的酶重新做PCR，回收产物连载体~
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-04-22 20:28:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2010-04-22 11:13:24:
我实验用到的载体片段长3000多，目的基因片段长2000多。导入大肠杆菌后菌液PCR得到的条带和预期一致，但是单酶切以后得到的条带却只有2000多bp。已经检查过了片段上应该只有一个酶切位点，那么为啥会出现这种情况呢

我用的是单酶切，而且目的片段上没有这个酶切位点，载体上有一个
赞一下 回复此楼
8楼2010-04-23 09:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-04-22 13:06:30:
是不是电泳没跑开？3000和2000要分开可是低电压得跑稀的长胶

我做的是单酶切，载体上有一个这样的酶切位点，目的基因上分析过是没有的。连接的方式是TA连接，引物上没有再引入酶切位点了。

[ Last edited by liuwei78 on 2010-4-23 at 09:35 ]
赞一下 回复此楼
9楼2010-04-23 09:31:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-04-22 13:28:32:
第一：PCR可能是假阳性结果
第二：检验酶切体系是否有问题，应该做个对照，最好是单双酶切一起做~~

我也怀疑是假阳性，不过为什么连载体的大小都没有P出来呢
赞一下 回复此楼
10楼2010-04-23 09:34:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuwei78 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-05 4/200 2026-04-05 22:49 by lbsjt
[考研] 0855求调剂材料 +11 红桃灼灼 2026-04-04 11/550 2026-04-05 22:13 by 醉翁wl
[考研] 0854电子信息319求调剂（接受跨专业调剂） +3 星星不眨眼喽 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:20 by 啵啵啵0119
[考研] 301求调剂 +5 细胞相关蛋白 2026-04-02 9/450 2026-04-05 20:14 by lys0704
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +10 大火山小火山 2026-04-05 10/500 2026-04-05 19:58 by 小蜗牛小蜗牛
[考研] 工科08-机械专硕-求调剂 +3 雷欧飞踢 2026-04-02 3/150 2026-04-05 18:49 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 318求调剂 +11 ykyhsa 2026-04-05 13/650 2026-04-05 12:44 by aidndnjck
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +8 相信必会光芒万� 2026-04-05 10/500 2026-04-05 12:19 by Hdyxbekcb
[考研] 270求调剂 +9 小杰pp 2026-03-31 11/550 2026-04-05 11:02 by 风雨无晴
[考研] 求调剂 +3 电气小神童 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:17 by barlinike
[考研] 333求调剂 +12 wfh030413@ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:02 by jj987
[考研] 一志愿C9的化学工程（085602） 340分，感觉校内调剂无望，求调剂 +9 万事宜臻 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:49 by 啵啵啵0119
[考研] 272求调剂，接受跨专业调剂！ +4 闲鱼卢 2026-03-31 4/200 2026-04-02 11:18 by guyan1000
[考研] 安全工程 285 求调剂 +3 Xinyu56 2026-04-01 4/200 2026-04-01 21:50 by 静静静静静静静�
[考研] 358求调剂 +3 王向阳花 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:56 by zzchen2000
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭