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liuwei78

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-04-22 13:29:25:
还有你的载体上是否也有这个酶切位点呢~~

载体上有这个酶切位点,不过引物设计时没有引入酶切位点,是直接TA连接的
11楼2010-04-23 09:36:26
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wlihust

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是假阳性 也有可能是酶连时没有连上~~
自己做做对照试验,验证一下
12楼2010-04-23 11:08:50
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xiangquanju

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2010-04-23 09:36:26:


载体上有这个酶切位点,不过引物设计时没有引入酶切位点,是直接TA连接的

T载体上是将多克隆位点去掉了的,不知道你是用的载体上的什么酶切位点?
13楼2010-04-23 11:15:38
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有时候有的问题确实很奇怪,我觉得,应该推到从来,载体换个,
14楼2010-04-23 14:34:15
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

如果你插入片段的时候用单酶切,那么插入片段后就变成2个酶切位点。
15楼2010-04-23 15:46:16
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-04-23 11:15:38:

T载体上是将多克隆位点去掉了的,不知道你是用的载体上的什么酶切位点?

用的是pMD19-T,上面有挺多酶切位点的
16楼2010-04-23 15:49:45
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2010-04-23 15:46:16:
如果你插入片段的时候用单酶切,那么插入片段后就变成2个酶切位点。

插入片段是TA连接,验证时用的是单酶切
17楼2010-04-23 15:50:36
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

遇到奇怪的地方,我通常重做一次
50%的时候能搞定
终于熬成木虫了……
18楼2010-04-24 07:21:02
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stliimoon

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2010-04-23 09:34:19:


我也怀疑是假阳性,不过为什么连载体的大小都没有P出来呢

你可以试一下用载体的启动子端的引物和载体末端的引物试着P一下,与未连接的对照组对比一下,参看长度,看是是否真的连上了
19楼2010-04-24 09:59:01
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