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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌液PCR和酶切的结果不符
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liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-04-22 13:29:25:
还有你的载体上是否也有这个酶切位点呢~~

载体上有这个酶切位点，不过引物设计时没有引入酶切位点，是直接TA连接的
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11楼2010-04-23 09:36:26
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wlihust

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是假阳性 也有可能是酶连时没有连上~~
自己做做对照试验，验证一下
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12楼2010-04-23 11:08:50
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2010-04-23 09:36:26:


载体上有这个酶切位点，不过引物设计时没有引入酶切位点，是直接TA连接的

T载体上是将多克隆位点去掉了的，不知道你是用的载体上的什么酶切位点？
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13楼2010-04-23 11:15:38
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有时候有的问题确实很奇怪，我觉得，应该推到从来，载体换个，
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14楼2010-04-23 14:34:15
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
如果你插入片段的时候用单酶切，那么插入片段后就变成2个酶切位点。
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15楼2010-04-23 15:46:16
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liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiangquanju at 2010-04-23 11:15:38:

T载体上是将多克隆位点去掉了的，不知道你是用的载体上的什么酶切位点？

用的是pMD19-T,上面有挺多酶切位点的
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16楼2010-04-23 15:49:45
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liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2010-04-23 15:46:16:
如果你插入片段的时候用单酶切，那么插入片段后就变成2个酶切位点。

插入片段是TA连接，验证时用的是单酶切
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17楼2010-04-23 15:50:36
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
遇到奇怪的地方，我通常重做一次
50%的时候能搞定
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终于熬成木虫了……
18楼2010-04-24 07:21:02
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stliimoon

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2010-04-23 09:34:19:


我也怀疑是假阳性，不过为什么连载体的大小都没有P出来呢

你可以试一下用载体的启动子端的引物和载体末端的引物试着P一下，与未连接的对照组对比一下，参看长度，看是是否真的连上了
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19楼2010-04-24 09:59:01
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