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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR和酶切的结果不符 已有11人参与

我实验用到的载体片段长3000多,目的基因片段长2000多。导入大肠杆菌后菌液PCR得到的条带和预期一致,但是单酶切以后得到的条带却只有2000多bp。已经检查过了片段上应该只有一个酶切位点,那么为啥会出现这种情况呢
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jlzkchong

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有可能你的目的片段在前期PCR的时候就出现了突变,酶切位点与原来不一样了,建议用高保真的酶重新做PCR,回收产物连载体~
7楼2010-04-22 20:28:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

是不是电泳没跑开?3000和2000要分开可是低电压得跑稀的长胶
2楼2010-04-22 13:06:30
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-22 14:43
第一:PCR可能是假阳性结果
第二:检验酶切体系是否有问题,应该做个对照,最好是单双酶切一起做~~
3楼2010-04-22 13:28:32
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

还有你的载体上是否也有这个酶切位点呢~~
4楼2010-04-22 13:29:25
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