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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR actin内参问题
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hqc87

铁虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR actin内参问题

做了两次逆转录，合成cDNA后以actin做内参，8个样品actin表达量竟然不一样啊！！？？两次（一次用500ngRNA，一次用2ug）都是同一个模式，电泳条带强的样品仍旧强，弱的仍旧弱，而且，我在合成cDNA前 用DNase处理RNA后特意跑了下胶，检测RNA完整性，8个样品RNA质量都没问题，但是合成cDNA后，扩actin怎么强度不一样呢，而且两次重复模式一样，不应该啊，困惑啊，求解！！
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1楼 2011-08-18 22:47:42
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kgz163

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-08-19 18:05:03
hqc87(金币+2): 谢谢！ 2011-08-19 22:05:21
你可以多设计几个内参。对于不同植物、不同材料，适合的内参是不一样的。

有文章表明，在水稻里，actin不是最好的内参，表现算是中等偏好。

我们前一段用18S做内参，表达差异也非常大
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2楼2011-08-19 11:44:49
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-08-19 18:05:23
hqc87(金币+2): 反转录成cDNA后，用cDNA做模板做PCR，actin和其他基因分管做，不在同一管 2011-08-19 22:07:04
你是反转和表达在一管完成么
有可能你反转录不彻底 获得的cDNA量就不一样
当然actin也确实不是很稳定的内标基因在某些植物中
你可以查查别人的文章 有很多关于内标基因筛选的文章
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3楼2011-08-19 12:47:08
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