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31569218

木虫 (正式写手)

[交流] 提取RNA时,为何会有DNA条带,并且有且只有一条带? 已有9人参与

提取RNA时,为何会有DNA条带,并且有且只有一条带?
我用的是试剂盒提取的,按理说不应该啊
操作很严格的啊,同实验室的野提了一样的结果
求助了
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爱之深痛之切
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 17:03:22
试剂盒提取也经常是有DNA污染的,我们加一个DNase处理。
2楼2011-06-20 10:51:29
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475502411

铜虫 (著名写手)

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amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-20 16:30:47
你用的枪头和EP管有没有处理过啊?是不是操作过程中RNA降解了?条带应该是污染,没有RNA的三条条带说明是降解,不过如果降解也应该有5S的条带啊,不可能就DNA条带的
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
3楼2011-06-20 14:11:49
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 19:17:52
会不会是污染降解了
4楼2011-06-20 15:23:05
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oyzh

铁杆木虫 (著名写手)

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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-20 17:03:33
DNA酶一般在经销商那边是和试剂盒分开保存的,送货的时候如果业务员没有把DNA酶放在冰盒中送过来,就可以拒收。

想想一个1300元左右的RNA提取试剂盒,DNA酶(单独购买)就占到800元。
5楼2011-06-20 16:37:32
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beautybanana

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+4): 专家出手了 2011-06-20 21:11:56
不知道你提的是什么样品,有的提出来了不一定会跑变性胶,所以条带会有所不同,你提好后先测下OD值,OD260/OD280。一般为1.8-2.0之间,RNA中蛋白或者是其他有机物的污染是可以接受,不过要注意,当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时,R值可能会大于2(一般应该是<2.2的)。当R<1.8时,溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显。当R>2.2时,说明RNA已经水解成单核酸了。
检测好,你可以反转录下试试看能不能扩增到你的目的基因片段,我从资料上也有看到用一般的琼脂糖电泳液可以,但是提RNA的时候要防止RNase的降解作用,电泳一段时间就要去观察以免久了看不见~
6楼2011-06-20 20:07:49
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wkw1001

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问楼上高手为什么电泳久了会看不见呢?
7楼2011-12-30 17:28:34
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植物园园长

金虫 (小有名气)


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看样子是降解了。
如果你的样本不是新鲜的,建议同时做一个新鲜叶片的RNA提取对照,如果新鲜的提出来了,而你的还是没提出来,很可能RNA在你现在的叶片中就降解了,就不用再提了,重新换新鲜样本来做。
在路上~~Marketing!
8楼2012-05-31 15:45:37
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lz莫担心,这种情况很正常,用DNAase纯化下即可。一般来说RNA试剂盒都说能避免DNA污染,但是实际情况还是因样品种类而异,我身边的同学有做动物也有做植物的,提取RNA也都是用的试剂盒,但是都有不同程度的DNA污染,这并不碍事,只要你的28s和18s完整,OD值ok那就没问题,用DNAase消化一下继续做RT就可以。
9楼2012-05-31 16:15:37
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13579_t

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主最后分析出来原因了么?我今天也遇到这样的问题~
fighting
10楼2014-07-21 17:07:06
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