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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 如何动态观察细菌体内某蛋白的分布，及表达量

如题，我的目标蛋白（G-菌的）极可能是分泌蛋白，分泌到G-菌的周质内发挥作用，怎样能检测它在菌体内的分布含量呢？ （另，我开始想用标签融合，但如果在其N端加融合蛋白的话可能就干扰其正常分泌，而且其C端有活性位点。）
请大家出个点子，谢谢
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1楼 2011-05-25 21:03:59
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很厉害啊 2011-05-26 12:51:52
youngsun50(金币+2): 2011-05-26 17:50:10
引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-25 21:03:59:
如题，我的目标蛋白（G-菌的）极可能是分泌蛋白，分泌到G-菌的周质内发挥作用，怎样能检测它在菌体内的分布含量呢？ （另，我开始想用标签融合，但如果在其N端加融合蛋白的话可能就干扰其正常分泌，而且其C端有活 ...

（1）直接跑SDS-PAGE就可以知道表达量了，以没有转入目的基因的为对照，差异条带就是你表达的蛋白。
（2）做蛋白之间的作用，不能加标签的话，你只能试试用抗原抗体的方法了，但是不好纯化。
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
2楼2011-05-25 22:17:46
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-25 22:17:46:
（1）直接跑SDS-PAGE就可以知道表达量了，以没有转入目的基因的为对照，差异条带就是你表达的蛋白。
（2）做蛋白之间的作用，不能加标签的话，你只能试试用抗原抗体的方法了，但是不好纯化。

"做蛋白之间的作用，不能加标签的话，你只能试试用抗原抗体的方法了，但是不好纯化。 "什么意思，能具体介绍一下吗，针对目的蛋白的抗体怎么得到，此方法能用于菌体内的检测吗？
谢谢
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3楼2011-05-26 16:59:01
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-26 16:59:01:
"做蛋白之间的作用，不能加标签的话，你只能试试用抗原抗体的方法了，但是不好纯化。 "什么意思，能具体介绍一下吗，针对目的蛋白的抗体怎么得到，此方法能用于菌体内的检测吗？
谢谢

不知道你的是什么蛋白，有没有商品化抗体，如果没有，就会麻烦好多。菌体内的也可以做，但是关键是有没有别的相对应的抗体，现在抗体已经很多商品化了。你这个挺难搞，我只能提供建议，具体的，我搞不定。
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4楼2011-05-26 17:03:39
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-26 17:03:39:
不知道你的是什么蛋白，有没有商品化抗体，如果没有，就会麻烦好多。菌体内的也可以做，但是关键是有没有别的相对应的抗体，现在抗体已经很多商品化了。你这个挺难搞，我只能提供建议，具体的，我搞不定。

我的目的蛋白是刚发现不久的，应该抗体还没商品化，如果这样，还有其他的方法吗，只能用抗体吗
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学会感恩，强大自我
5楼2011-05-26 17:49:45
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 热心 2011-05-26 21:58:03
还有一种办法，但是好像国内只有两个地方能做，具体名字我忘记了，中科院物理所好像能做，是尝试的问问看。这个有点难，我帮不上你。
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6楼2011-05-26 19:41:56
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-26 19:41:56:
还有一种办法，但是好像国内只有两个地方能做，具体名字我忘记了，中科院物理所好像能做，是尝试的问问看。这个有点难，我帮不上你。

谢谢，是物理所还是生物物理所？
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7楼2011-05-26 22:35:52
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-26 22:35:52:
谢谢，是物理所还是生物物理所？

是生物物理所，没打全，不好意思，希望对你有帮助。
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8楼2011-05-26 22:46:01
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youngsun50

木虫 (正式写手)
太感谢了 祝你好运
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9楼2011-05-26 22:50:46
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