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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 如何动态观察细菌体内某蛋白的分布,及表达量

如题,我的目标蛋白(G-菌的)极可能是分泌蛋白,分泌到G-菌的周质内发挥作用,怎样能检测它在菌体内的分布含量呢? (另,我开始想用标签融合,但如果在其N端加融合蛋白的话可能就干扰其正常分泌,而且其C端有活性位点。)
请大家出个点子,谢谢
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学会感恩,强大自我
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

★ ★
西瓜(金币+2): 热心 2011-05-26 21:58:03
还有一种办法,但是好像国内只有两个地方能做,具体名字我忘记了,中科院物理所好像能做,是尝试的问问看。这个有点难,我帮不上你。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
6楼2011-05-26 19:41:56
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很厉害啊 2011-05-26 12:51:52
youngsun50(金币+2): 2011-05-26 17:50:10
引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-25 21:03:59:
如题,我的目标蛋白(G-菌的)极可能是分泌蛋白,分泌到G-菌的周质内发挥作用,怎样能检测它在菌体内的分布含量呢? (另,我开始想用标签融合,但如果在其N端加融合蛋白的话可能就干扰其正常分泌,而且其C端有活 ...

(1)直接跑SDS-PAGE就可以知道表达量了,以没有转入目的基因的为对照,差异条带就是你表达的蛋白。
(2)做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
2楼2011-05-25 22:17:46
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youngsun50

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-25 22:17:46:
(1)直接跑SDS-PAGE就可以知道表达量了,以没有转入目的基因的为对照,差异条带就是你表达的蛋白。
(2)做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。

"做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。 "什么意思,能具体介绍一下吗,针对目的蛋白的抗体怎么得到,此方法能用于菌体内的检测吗?
谢谢
学会感恩,强大自我
3楼2011-05-26 16:59:01
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-26 16:59:01:
"做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。 "什么意思,能具体介绍一下吗,针对目的蛋白的抗体怎么得到,此方法能用于菌体内的检测吗?
谢谢

不知道你的是什么蛋白,有没有商品化抗体,如果没有,就会麻烦好多。菌体内的也可以做,但是关键是有没有别的相对应的抗体,现在抗体已经很多商品化了。你这个挺难搞,我只能提供建议,具体的,我搞不定。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
4楼2011-05-26 17:03:39
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