24小时热门版块排行榜    

查看: 1090  |  回复: 8
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 如何动态观察细菌体内某蛋白的分布,及表达量

如题,我的目标蛋白(G-菌的)极可能是分泌蛋白,分泌到G-菌的周质内发挥作用,怎样能检测它在菌体内的分布含量呢? (另,我开始想用标签融合,但如果在其N端加融合蛋白的话可能就干扰其正常分泌,而且其C端有活性位点。)
请大家出个点子,谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

学会感恩,强大自我
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-26 17:03:39:
不知道你的是什么蛋白,有没有商品化抗体,如果没有,就会麻烦好多。菌体内的也可以做,但是关键是有没有别的相对应的抗体,现在抗体已经很多商品化了。你这个挺难搞,我只能提供建议,具体的,我搞不定。

我的目的蛋白是刚发现不久的,应该抗体还没商品化,如果这样,还有其他的方法吗,只能用抗体吗
学会感恩,强大自我
5楼2011-05-26 17:49:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很厉害啊 2011-05-26 12:51:52
youngsun50(金币+2): 2011-05-26 17:50:10
引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-25 21:03:59:
如题,我的目标蛋白(G-菌的)极可能是分泌蛋白,分泌到G-菌的周质内发挥作用,怎样能检测它在菌体内的分布含量呢? (另,我开始想用标签融合,但如果在其N端加融合蛋白的话可能就干扰其正常分泌,而且其C端有活 ...

(1)直接跑SDS-PAGE就可以知道表达量了,以没有转入目的基因的为对照,差异条带就是你表达的蛋白。
(2)做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
2楼2011-05-25 22:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngsun50

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-05-25 22:17:46:
(1)直接跑SDS-PAGE就可以知道表达量了,以没有转入目的基因的为对照,差异条带就是你表达的蛋白。
(2)做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。

"做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。 "什么意思,能具体介绍一下吗,针对目的蛋白的抗体怎么得到,此方法能用于菌体内的检测吗?
谢谢
学会感恩,强大自我
3楼2011-05-26 16:59:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by youngsun50 at 2011-05-26 16:59:01:
"做蛋白之间的作用,不能加标签的话,你只能试试用抗原抗体的方法了,但是不好纯化。 "什么意思,能具体介绍一下吗,针对目的蛋白的抗体怎么得到,此方法能用于菌体内的检测吗?
谢谢

不知道你的是什么蛋白,有没有商品化抗体,如果没有,就会麻烦好多。菌体内的也可以做,但是关键是有没有别的相对应的抗体,现在抗体已经很多商品化了。你这个挺难搞,我只能提供建议,具体的,我搞不定。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
4楼2011-05-26 17:03:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +6 材料专硕调剂; 2026-02-28 7/350 2026-03-01 09:21 by L135790
[考研] 272求调剂 +4 材紫有化 2026-02-28 4/200 2026-03-01 09:20 by L135790
[考研] 0856求调剂285 +5 吕仔龙 2026-02-28 5/250 2026-03-01 09:18 by L135790
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-02-28 5/250 2026-03-01 08:49 by ms629
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见