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【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR,β-actin内参出现两个条带,求原因。
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zwdnet(金币+1): 对我帮助很大,非常感谢! 2011-02-22 12:21:56
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楼主的引物多长?如果在20边上徘徊的话估计是引物太短,特异性不够,可以考虑设计到25左右,而且可以把引物放到NCBI的引物BLAST里去BLAST一下,看是不是可以PCR出其他产物。另外可以增加退火温度,提高特异性。 如果楼主要进行统计学分析,个人认为必须3份分开提RNA,不能一起提了再分开做,不然就相当于是只有一个样本,重复3次而已。楼主要的是3个平行样本。 另外,提醒下楼主,内参的作用是用于消除模板量的差异,但是PCR的循环数和模板达到一定量时,产物的总量会达到一个平台,也就是说,模板加多加少,产物跑胶都会差不多的亮,这样楼主就会认为各体系内加入的模板数量是一样的(其实不可能一样),于是内参来消除模板量差异就无法起作用,要减少循环数,以达到内参之间的亮度有差异。 |
8楼2011-02-19 09:36:19
2楼2011-01-28 16:28:38
3楼2011-01-28 23:48:29
4楼2011-01-30 09:58:54













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