应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白表达求助
111/1返回列表
查看: 1262  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gaochaohui

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白表达求助

用大肠杆菌作为宿主细胞表达一种蛋白质，导入含有目的基因的质粒后，在含有标记抗生素的LB培养基上长出了单菌落。IPTG诱导培养后，破菌做电泳，在上清和沉淀中都没有明显的目的蛋白的条带。有可能是什么原因呢？我专业不是学生物的，求比较了解这方面的虫友指点一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-20 11:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
rainwander(金币+1): 这都有可能~~~ 2011-01-20 13:32:45
gaochaohui(金币+1): 2011-01-20 16:53:28
蛋白没表达。可能是宿主不合适或者载体不合适
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-20 12:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhougama

禁虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 是的，应该首先鉴定正确后在做表达的 2011-01-20 13:33:08
gaochaohui(金币+2): 2011-01-20 16:53:36
本帖内容被屏蔽
3楼2011-01-20 12:37:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biowandy

木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 很正确，呵呵，鼓励积极参与~~~ 2011-01-20 13:33:26
gaochaohui(金币+2): 2011-01-20 16:53:42
引用回帖:
Originally posted by gaochaohui at 2011-01-20 11:45:18:
用大肠杆菌作为宿主细胞表达一种蛋白质，导入含有目的基因的质粒后，在含有标记抗生素的LB培养基上长出了单菌落。IPTG诱导培养后，破菌做电泳，在上清和沉淀中都没有明显的目的蛋白的条带。有可能是什么原因呢？我 ...

你转化后挑了单克隆腰测序的，、测序确认你转进去了那个目的基因才能进行后续的表达。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-01-20 13:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaochaohui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biowandy at 2011-01-20 13:01:45:





你转化后挑了单克隆腰测序的，、测序确认你转进去了那个目的基因才能进行后续的表达。

我们实验室没有条件进行基因测序，所以选择做电泳，通过电泳条带的对比来判断目的蛋白是否得到表达。如果排除上面的虫友所说的可能的原因，质粒正确。还会有其他的原因吗？谢谢各位虫友。
赞一下 回复此楼
5楼2011-01-20 17:06:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuexue1204

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
测序是最好的检测啊，都是送生物公司测序的，几十块就哦了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-01-20 17:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JASON13

银虫 (小有名气)

拿到未知质粒的第一件事

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
务必先转化，自己提一管，再跑胶看大小。不过，测序是王道。。。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-01-20 18:09:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

375050424

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
表达之前肯定要测序确定没有发生移码
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-01-20 20:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guang012345

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是做这个的，不过我比较菜
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-01-20 21:59:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

101202139

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我个人认为是不是你的IPTG的最终浓度的问题，还有可能是你的诱导温度和时间，可以尝试一下不同的梯度！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-01-20 22:42:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaochaohui

新虫 (小有名气)
谢谢各位虫友的帮助，按照各位提供的方法再试一试。再次谢谢大家啊！
赞一下 回复此楼
11楼2011-01-21 08:42:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gaochaohui 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +5 ￣^￣゜汗 2026-03-19 7/350 2026-03-22 19:44 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 284求调剂 +5 Zhao anqi 2026-03-22 5/250 2026-03-22 17:38 by barlinike
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-17 9/450 2026-03-21 02:17 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭