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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白表达求助
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gaochaohui

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白表达求助

用大肠杆菌作为宿主细胞表达一种蛋白质，导入含有目的基因的质粒后，在含有标记抗生素的LB培养基上长出了单菌落。IPTG诱导培养后，破菌做电泳，在上清和沉淀中都没有明显的目的蛋白的条带。有可能是什么原因呢？我专业不是学生物的，求比较了解这方面的虫友指点一下。
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1楼 2011-01-20 11:45:18
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
rainwander(金币+1): 这都有可能~~~ 2011-01-20 13:32:45
gaochaohui(金币+1): 2011-01-20 16:53:28
蛋白没表达。可能是宿主不合适或者载体不合适
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2楼2011-01-20 12:32:16
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zhougama

禁虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 是的，应该首先鉴定正确后在做表达的 2011-01-20 13:33:08
gaochaohui(金币+2): 2011-01-20 16:53:36
本帖内容被屏蔽
3楼2011-01-20 12:37:33
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biowandy

木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 很正确，呵呵，鼓励积极参与~~~ 2011-01-20 13:33:26
gaochaohui(金币+2): 2011-01-20 16:53:42
引用回帖:
Originally posted by gaochaohui at 2011-01-20 11:45:18:
用大肠杆菌作为宿主细胞表达一种蛋白质，导入含有目的基因的质粒后，在含有标记抗生素的LB培养基上长出了单菌落。IPTG诱导培养后，破菌做电泳，在上清和沉淀中都没有明显的目的蛋白的条带。有可能是什么原因呢？我 ...

你转化后挑了单克隆腰测序的，、测序确认你转进去了那个目的基因才能进行后续的表达。
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4楼2011-01-20 13:01:45
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gaochaohui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biowandy at 2011-01-20 13:01:45:





你转化后挑了单克隆腰测序的，、测序确认你转进去了那个目的基因才能进行后续的表达。

我们实验室没有条件进行基因测序，所以选择做电泳，通过电泳条带的对比来判断目的蛋白是否得到表达。如果排除上面的虫友所说的可能的原因，质粒正确。还会有其他的原因吗？谢谢各位虫友。
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5楼2011-01-20 17:06:02
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
测序是最好的检测啊，都是送生物公司测序的，几十块就哦了
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6楼2011-01-20 17:39:54
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JASON13

银虫 (小有名气)

拿到未知质粒的第一件事

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
务必先转化，自己提一管，再跑胶看大小。不过，测序是王道。。。
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7楼2011-01-20 18:09:27
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375050424

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
表达之前肯定要测序确定没有发生移码
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8楼2011-01-20 20:33:37
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guang012345

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是做这个的，不过我比较菜
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9楼2011-01-20 21:59:34
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101202139

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我个人认为是不是你的IPTG的最终浓度的问题，还有可能是你的诱导温度和时间，可以尝试一下不同的梯度！
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10楼2011-01-20 22:42:46
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gaochaohui

新虫 (小有名气)
谢谢各位虫友的帮助，按照各位提供的方法再试一试。再次谢谢大家啊！
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11楼2011-01-21 08:42:28
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