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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白表达求助
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gaochaohui

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白表达求助

用大肠杆菌作为宿主细胞表达一种蛋白质，导入含有目的基因的质粒后，在含有标记抗生素的LB培养基上长出了单菌落。IPTG诱导培养后，破菌做电泳，在上清和沉淀中都没有明显的目的蛋白的条带。有可能是什么原因呢？我专业不是学生物的，求比较了解这方面的虫友指点一下。
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1楼2011-01-20 11:45:18
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gaochaohui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biowandy at 2011-01-20 13:01:45:





你转化后挑了单克隆腰测序的，、测序确认你转进去了那个目的基因才能进行后续的表达。

我们实验室没有条件进行基因测序，所以选择做电泳，通过电泳条带的对比来判断目的蛋白是否得到表达。如果排除上面的虫友所说的可能的原因，质粒正确。还会有其他的原因吗？谢谢各位虫友。
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5楼2011-01-20 17:06:02
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gaochaohui

新虫 (小有名气)
谢谢各位虫友的帮助，按照各位提供的方法再试一试。再次谢谢大家啊！
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11楼2011-01-21 08:42:28
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