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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】第一次pcr有目的条带，后来就做不出来了这是为什么呢？
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luzeyan

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】第一次pcr有目的条带，后来就做不出来了这是为什么呢？

自己设的引物,第一次pcr有目的带（较弱一点），再后来就p不出来了，这问题出在哪儿呢？
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1楼 2011-01-17 20:25:38
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
模板分装了么？TE溶解的？？冻融过几次？？
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2楼2011-01-17 20:29:40
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luzeyan

金虫 (小有名气)

TE是什么？

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-17 20:29:40:
模板分装了么？TE溶解的？？冻融过几次？？

模板是cDNA，逆转录试剂盒合成的，约20ul每一小管，冻融多次直到这一管用完为止。TE是什么？用双蒸水溶解的
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3楼2011-01-17 20:37:59
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
luzeyan(金币+1): 谢谢你 2011-01-18 08:14:38
dhd997(金币+2): good 2011-01-18 09:00:07
哦，冻融多次。。。。。。还有备用的没有冻融过的么。。
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4楼2011-01-17 20:50:57
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luzeyan

金虫 (小有名气)

有的

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-17 20:50:57:
哦，冻融多次。。。。。。还有备用的没有冻融过的么。。

有的，也拿来做过了，还是无条带
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5楼2011-01-17 20:57:16
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QIAO4984

铜虫 (小有名气)
★ ★
luzeyan(金币+1): 谢谢 2011-01-18 08:15:47
dhd997(金币+2): 感谢交流 2011-01-18 09:00:24
你CDNA质量不好   

如果RNA片段丢失了一部分     反转录的CDNA永远不全

当然也扩不出


重新反转录
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6楼2011-01-17 23:38:52
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 有道理。还是给几条建议吧。 2011-01-18 09:00:54
我一般pcr 不出来， 至少重复三次。 每次分别做对照。  

    不用来问了。 可以告诉你。 原因有一千个。 问了也白问。 自己多做几次吧。
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7楼2011-01-17 23:41:54
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甲子沫

金虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 呵呵，这就是TE~~~ 2011-01-18 15:12:28
TE=tris-HCl+EDTA
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8楼2011-01-18 14:24:15
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guang012345

新虫 (初入文坛)
我也是出现这种情况，爱莫能助，多试试看吧
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9楼2011-01-19 17:08:50
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
仔细检查一下看看前后试验有什么不同，肯定有地方改变了。
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10楼2011-01-19 17:40:46
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