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zhangfei7706

木虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】PCR产物测序总是不对

最近一直在设计豚鼠的HMGCoA R基因，因为NCBI上没有公布序列，就找了其它几个物种的序列，比对后找到相似度高的序列作为保守区设计引物，结果1，无条带；2，有非特异性条带；3，目的条带有但送去测序发现不是该基因。目前一点进展都没有。请问1.保守区怎么确定？2.目的条带一般应多大？3.T载体连接测序的方法。恳请指点

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1楼 2011-01-10 14:51:32

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amilie030312

金虫 (正式写手)

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zhangfei7706(金币+2): 2011-01-10 16:58:39

用软件就可以确定保守序列位置，我比较习惯用BioEdit，找到保守区序列以后再在保守区的范围内看是否能出合适的引物，实在不行就设计个兼并碱基，先用Taq拉，如果拉的出来再用高保真酶拉测序
你测序的序列不对是完全不对还是有部分不对啊，部分不对是可能的，如果都不对那就说明你的引物设计的有问题了，引物设计好了之后先在Blast上面搜一下再做比较靠谱