24小时热门版块排行榜    

查看: 5128  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

love_st

金虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题

我的一对引物探针,高浓度的扩增没有问题,而低浓度却扩增不好,荧光信号很低,为什么?图中那两条扩增曲线是模板浓度十倍稀释的!请大家帮我看看哦!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
love_st(金币+7):谢谢,我想改变下引物或许有好的结果 2010-12-09 15:39:13
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2010-12-09 11:44:35:

ABI7500的,染料是FAM,荧光值和模板浓度一般也是会呈现梯度下降的,这个下降的太多了,所以图形很难看,我想知道或者想讨论的是,什么因素导致低浓度的扩增效率不高,我想可能是我的引物本身的问题,那么能否改 ...

低浓度模板扩增效率问题是一个普遍的现象,和引物质量有直接关系

1,不管有没有扩增出目的片段,只要里边有模板,从第一个循环开始就会消耗引物,而且模板越多越复杂,消耗就越大,基因组远大于质粒的消耗。这样30个循环下来就消耗了大量的引物,越往后效率越低是难免的

2,引物的初始浓度也不能太高了,太高了就会增加非特异性和二聚体等杂带

3,如果引物本身的质量不是特别好,经过30轮的折腾,里边难免会形成一些引物自身的二级结构导致引物序列的改变(taq酶是很厉害的,只要有一点点的机会,他也能给你往上添加碱基。这个你应该可以理解)

所以,以上三点不难看出,为什么大家都知道低浓度模板扩增效果差,却无法解决了

貌似你的问题如果想彻底解决,推荐换一对更好的引物。

不过半对数的图也行会更好

个人观点
9楼2010-12-09 15:10:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
love_st(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:59:09
做了几个复孔啊, 第二条明显不对啊
3楼2010-12-09 08:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-09 08:50:27:
做了几个复孔啊, 第二条明显不对啊

做了很多重复,这对引物探针就是这样,高浓度的模板扩增挺好,就是低浓度的模板突然不呈梯度的荧光信号突然下降的厉害,体系优化似乎也优化不出来
4楼2010-12-09 08:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最好还是多些数据,两条线不太好分析啊

[ Last edited by silicare on 2010-12-9 at 09:50 ]
5楼2010-12-09 10:32:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见