应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌液PCR问题
51/1返回列表
查看: 1276  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zzzccc

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR问题 已有4人参与

各位大仙给个意见，我最近想筛CDNA文库，挑了180个斑，前100多个摇了菌后PCR的结果都不错，可后几十个怎么都扩不出来。
   补充的是，我都是200转摇了6-7个小时，而且我摇出来的菌大多时间放在4°，共4、5天，并且我在准备PCR的时候菌在室温下放的时间也比较长，每次扩都放2、3个小时。这些是不是有影响，而且我有检测了一下我最初扩出的菌现在又扩增不出来了。郁闷，我刚刚接触分子方面的实验，请帮我找找原因，不胜感激！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-03 23:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-12-04 08:22:16
normally I follow this protocol
E. coli Colony PCR
1. Pick colony with toothpick and swirl into 25 μl of TE (or dH2O) in microfuge tube.
2. Heat in boiling water bath for 2 minutes (can be used directly for PCR).
3. Spin for 2 minutes at top speed in microfuge.
4. Transfer 20 μl of supernatant to new microfuge tube.
5. Use 1-2 μl as template in 25 μl PCR reaction.

in my hands it works well


maybe your culture concentration is too high, which affects the PCR reaction
赞一下(2人) 回复此楼
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
2楼2010-12-04 00:34:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
沙发同学方法很好啊，我要试试
赞一下(1人) 回复此楼
一直向前！
3楼2010-12-04 09:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
菌液pcr需要运气
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-04 10:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzzccc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wangleisdnu at 2010-12-04 00:34:11:
normally I follow this protocol
E. coli Colony PCR
1. Pick colony with toothpick and swirl into 25 μl of TE (or dH2O) in microfuge tube.
2. Heat in boiling water bath for 2 minutes (can be use ...

可能不是，我开始扩的结果都很好。郁闷！！，现在即便用原来的模板也扩不出来了，只能看到引物二聚体
赞一下 回复此楼
5楼2010-12-04 16:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zzzccc 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +7 wangze12014 2026-08-14 8/400 2026-08-17 12:45 by a441914426
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 13/650 2026-08-17 12:33 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭