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panl234

银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来已有6人参与

从九月初开始一直在做基因克隆，目的片段981bp，载体用的是pcDNA3.0（原先师姐已经插入了一个981bp的片段），我把载体重新酶切，连上自己的片段，从cDNA得到的片段是981bp，就是到验证时片段就变成了750bp，特别亮，十分特异！但酶切还是有981bp的带，是哪布出了问题？

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1楼2010-11-13 13:36:31

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panl234

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引用回帖:

Originally posted by yuhuimeiye at 2010-11-13 14:42:36:
楼主，你把你的目的序列与载体序列进行一下比对，看其是否有相似序列，如果没有，请核实一下你的引物，如果引物能扩增的片段也是981bp，就再考虑一下你扩增时候延伸时间是否达到一分钟。最后，建议楼主进行测序， ...

从才cDNA里p用的是pfu酶，延伸时间是1min，验证那步用的是rTaq,1min