24小时热门版块排行榜    

查看: 1877  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

panl234

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】基因克隆时,酶切有结果,PCR却P不出来 已有6人参与

从九月初开始一直在做基因克隆,目的片段981bp,载体用的是pcDNA3.0(原先师姐已经插入了一个981bp的片段),我把载体重新酶切,连上自己的片段,从cDNA得到的片段是981bp,就是到验证时片段就变成了750bp,特别亮,十分特异!但酶切还是有981bp的带,是哪布出了问题?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panl234

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yuhuimeiye at 2010-11-13 14:42:36:
楼主,你把你的目的序列与载体序列进行一下比对,看其是否有相似序列,如果没有,请核实一下你的引物,如果引物能扩增的片段也是981bp,就再考虑一下你扩增时候延伸时间是否达到一分钟。最后,建议楼主进行测序, ...

从才cDNA里p用的是pfu酶,延伸时间是1min,验证那步用的是rTaq,1min
8楼2010-11-13 16:36:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主,你把你的目的序列与载体序列进行一下比对,看其是否有相似序列,如果没有,请核实一下你的引物,如果引物能扩增的片段也是981bp,就再考虑一下你扩增时候延伸时间是否达到一分钟。最后,建议楼主进行测序,无论是扩增还是酶切验证,都是粗略的,最真实的还是测序,建议直接测序。
2楼2010-11-13 14:42:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leo_stu

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
拿载体做实验前还是先测序下。
-------------------------Science,Cell,Nature---------------
3楼2010-11-13 16:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panl234

银虫 (正式写手)

多谢!
我也很想直接去测序,都做了两遍了!可是老板一看PCR结果就说:不能测!谢谢你的建议
4楼2010-11-13 16:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 265求调剂 +4 梁梁校校 2026-03-19 4/200 2026-03-20 00:03 by 23Postgrad
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +18 rare12345 2026-03-18 18/900 2026-03-19 22:36 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by !本暗一次!
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见