应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题
141/2返回列表12下一页
查看: 2334  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

恒星年

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题 已有2人参与

各位高手，我现在要做一个基因的克隆，上游引物只能用NcoI，下游只能用BamHI，但是在载体上这两个酶的酶切位点是重合的，切了一个另外一个就不能切了，应该怎么办啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-05 17:59:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恒星年

银虫 (正式写手)
怎么没人进来啊？自己顶个先
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-05 18:35:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hnndpt

铁虫 (正式写手)
恒星年(金币+1):谢谢，但是应该是有办法解决的 2010-11-05 19:03:38
估计得重新构建载体了
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-05 18:51:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hnndpt

铁虫 (正式写手)
估计得重新构建载体了
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-05 18:51:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
恒星年(金币+1):谢谢，由于特殊要求所以不能单切啊 2010-11-09 10:28:20
单酶切连接了。
回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2010-11-08 12:16:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
恒星年(金币+2):谢谢，我去学习下这个方法怎么用，呵呵 2010-11-09 10:29:36
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-11-08 12:16:51:
单酶切连接了。

他设计的双酶切连接，你觉得单酶切连接的方案能行吗？
楼主有没有做过重组，就是设两条带重组臂的上下游引物，重新扩片段，载体经单酶切后把片段用重组酶重组到目标载体那
赞一下 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2010-11-08 13:15:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuxian1

银虫 (小有名气)
估计得重新设计引物了
赞一下 回复此楼
我与你一起闯天下
7楼2010-11-08 14:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-08 23:06:22
恒星年(金币+1):谢谢 2010-11-09 10:31:03
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-08 13:15:22:

他设计的双酶切连接，你觉得单酶切连接的方案能行吗？
楼主有没有做过重组，就是设两条带重组臂的上下游引物，重新扩片段，载体经单酶切后把片段用重组酶重组到目标载体那

单酶切连接还是比较成熟和传统得方法的，载体用碱性磷酸酶处理下，以减少自连。
你所说的用同源重组的方法，不知道是不是SLIC，其实很多这种方法文献来源影响因子倒是挺高的，但是可行性和成功率没有他们吹嘘的那样好。个人感觉还是传统得方法保险。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
8楼2010-11-08 15:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-08 23:06:39
恒星年(金币+1):谢谢，这样的话NcoI就是平末端了 2010-11-09 10:30:14
是否可以先切NcoI，用酶补平之后再加几个碱基在前面，再切BamhI，不知道这样是否可行，非要切这样可以试试，能不能做出来就不知道了
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-11-08 16:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2):眼睛要保护 2010-11-10 10:37:34
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-11-08 16:00:52:
是否可以先切NcoI，用酶补平之后再加几个碱基在前面，再切BamHI，不知道这样是否可行，非要切这样可以试试，能不能做出来就不知道了

此方法不可行，NcoI单酶切完了之后进行补平，把刚产生的NcoI的粘性末端也补平了，之后用BamHI确实有可能切开，但得不到NotI的粘性末端

[ Last edited by 空谷幽风 on 2010-11-8 at 17:13 ]
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
10楼2010-11-08 17:05:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 恒星年 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +9 冬十三 2026-03-15 10/500 2026-03-17 22:53 by lbsjt
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 化学工程321分求调剂 +11 大米饭！ 2026-03-15 14/700 2026-03-17 17:11 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料与化工 +4 安全上岸！ 2026-03-16 4/200 2026-03-17 14:02 by 勇敢太监王公公
[考博] 26申博 +4 八旬速览 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +6 SUICHILD 2026-03-12 6/300 2026-03-17 09:24 by 雾散后相遇lc
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 求调剂（材料与化工327） +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭