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【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题已有2人参与
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各位高手，我现在要做一个基因的克隆，上游引物只能用NcoI，下游只能用BamHI，但是在载体上这两个酶的酶切位点是重合的，切了一个另外一个就不能切了，应该怎么办啊？  |
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空谷幽风
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6楼2010-11-08 13:15:22
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scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-08 23:05:37
恒星年(金币+2):谢谢，呵呵，受教了 2010-11-09 10:27:12
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恒星年(金币+2):谢谢，呵呵，受教了 2010-11-09 10:27:12
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如果你的片段是通过PCR方法拿到的，并且在载体的酶切位点多引入碱基对你结果没什么影响的话可以试一下这种方法：把载体用NcoI或BamHI单切，然后补平，在进行一步去磷酸化，减少载体自连。载体这样处理后就可以把片段直接装进去了。 另外，同源重组的方法成功率很高的，我们公司每天都在做重组，如果载体片段处理的都没什么问题，只要长得斑基本都是阳性克隆。 [ Last edited by 空谷幽风 on 2010-11-8 at 17:14 ] |
11楼2010-11-08 17:11:25
空谷幽风
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13楼2010-11-10 10:11:18