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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题
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恒星年

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题 已有2人参与

各位高手，我现在要做一个基因的克隆，上游引物只能用NcoI，下游只能用BamHI，但是在载体上这两个酶的酶切位点是重合的，切了一个另外一个就不能切了，应该怎么办啊？
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1楼 2010-11-05 17:59:42
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):热心鼓励。 2010-11-10 10:20:51
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-11-08 21:16:43:
请问你的同源臂是多长，用的重组酶是体外用，还是宿主体内表达的重组酶。一般原核有这么强的重组能力吗？我表示怀疑哦。

重组臂23-25bp，重组酶可以从金斯特买成品（不过比较贵哦），重组完的质粒在Top10中扩增，完全没有问题
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
13楼2010-11-10 10:11:18
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恒星年

银虫 (正式写手)
怎么没人进来啊？自己顶个先
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2楼2010-11-05 18:35:08
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
恒星年(金币+1):谢谢，但是应该是有办法解决的 2010-11-05 19:03:38
估计得重新构建载体了
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3楼2010-11-05 18:51:15
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
估计得重新构建载体了
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4楼2010-11-05 18:51:27
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