| 查看: 844 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
angel_yy金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】求构建质粒的具体步骤 谢谢 已有4人参与
|
||
| 刚进入分子生物学实验室对质粒的构建很困惑，求构建质粒的具体步骤 谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有79人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒构建
已经有13人回复
- 求助一个关于酿酒酵母转化的问题
已经有19人回复
- 构建好的质粒如何防止丢失
已经有12人回复
- 关于质粒的构建
已经有17人回复
- 求助关于质粒提取的若干问题，谢谢了！！
已经有5人回复
- 做好的质粒如果用完了，用怎样的步骤繁殖新的，保证质粒的质量啊？
已经有5人回复
- 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题，我需要你的帮助，谢谢
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～
已经有16人回复
- 【求助/交流】质粒PCR产物的回收（质粒构建）
已经有11人回复
- 【求助/交流】质粒构建步骤，回答的好，还有几十金币追加！！！！
已经有13人回复
- 【求助/交流】请教质粒构建问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】【质粒求助】谢谢好心人了
已经有6人回复
- 【求助/交流】枯草芽孢杆菌转外源基因
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于质粒DNA转化中，Ca离子的作用问题.谢谢！
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于质粒构建与表达的问题
已经有14人回复
feiye2214
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1824.9
- 散金: 403
- 红花: 5
- 帖子: 564
- 在线: 209小时
- 虫号: 883642
- 注册: 2009-10-25
- 性别: GG
- 专业: 海洋环境科学
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):热心虫友，谢谢交流。 2010-10-12 21:54:36
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):热心虫友，谢谢交流。 2010-10-12 21:54:36
|
那哥哥就拿自己怎么重组一个质粒来说说！ 构建质粒大体有两种形式，一是加启动子，二是加基因序列 我之前做的是给一个空质粒（无启动子）加上一个自己做的启动子，启动子序列是来自青鱼的b-actin基因的调控序列，这个序列已经被提交到NCBI上的，所以找到引物（肯定有文章，因为已经提交了），要不设计一个引物（因为有序列了，很好设计，有软件，或者找公司设计），从引物到PCR就不用说了吧，把这段序列抠出来！（再插一句，把酶切位点设计进引物的两端，后面详细） 既然是空质粒，那么在基因（一般是标记基因GFP/EGFP，用来检测启动子效果）的前面肯定有酶切位点，就是前面说到的酶切位点，顺序不能搞反 这样，把PCR出来的片段（两段已经有酶切位点序列了）和空载质粒同时用相应的内切酶酶切，那么都具有粘性末端了，在把具有粘性末端的质粒（线性的了，被切开了）和PCR片段混合加酶链接，组装成你需要的质粒！！OK 效率很低的，得到的重组质粒当然很少，再把得到的重组质粒转化进大肠杆菌感受态细胞中，使其大量的复制（扩大培养），然后你提取菌液里的质粒，检测，留种！OK啦 再不清晰的，M我吧 |
7楼2010-10-12 21:44:20
D-frank
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 238.7
- 散金: 15
- 帖子: 57
- 在线: 45.6小时
- 虫号: 1114160
- 注册: 2010-10-05
- 性别: GG
- 专业: 计算机科学的基础理论
2楼2010-10-12 17:37:04
feiye2214
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1824.9
- 散金: 403
- 红花: 5
- 帖子: 564
- 在线: 209小时
- 虫号: 883642
- 注册: 2009-10-25
- 性别: GG
- 专业: 海洋环境科学
3楼2010-10-12 17:42:13
4楼2010-10-12 17:59:06
