| 查看: 2516 | 回复: 11 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
superadeel新虫 (初入文坛)
|
[交流]
【求助/交流】土壤细菌多样性，引物F357GC R518 PCR老是出问题，求救！ 已有6人参与
|
|||
|
做土壤细菌多样性时，提的DNA用F357-GC和R518跑PCR ，能扩出来，但是条带很宽，很模糊，后续DGGE切胶，也是P出来很模糊，测序测不出来。 请问哪位大侠做过，经验分享一下，不胜感激。按理来说这个应该很容易做出来，不知道到我这里出了什么问题。 25ul体系：mix 12.5ul, 引物（10UM）各0.5uL，水10.5ul,模板1uL。（用Takara Ex tap 酶体系也做过） 程序：用touchdown，94度6分钟，94度1分钟，65-55度45秒（一循环降0.5度），72度45秒，20循环。后15个循环是94度1分钟，55度45秒，72度45秒。最后延伸10分钟。 [ Last edited by superadeel on 2010-9-28 at 16:58 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 土壤微生物 |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有268人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR引物中M、S、R、H等字母是什么意思？
已经有7人回复
- DGGE胶浓度有问题，
已经有4人回复
- 请问古细菌的通用引物是什么？
已经有5人回复
- 土壤细菌DNA PCR问题
已经有6人回复
- 土壤总细菌16S PCR-条带不亮的问题
已经有19人回复
- 求助关于土壤细菌分离鉴定的知识，希望朋友帮忙解答
已经有8人回复
- ISSR-PCR的引物问题是只用1条？
已经有9人回复
- 细菌整个群落的DGGE引物
已经有4人回复
- 土壤真菌PCR-DGGE中真菌ITS区引物的选择
已经有10人回复
- 合成一段DNA的问题？引物，PCR
已经有13人回复
- 细菌引物 338F 518R 做DGGE之后 pcr
已经有9人回复
- 土壤真菌PCR，引物选择问题
已经有8人回复
- 求助细菌通用引物的区别
已经有4人回复
- 细菌16s pcr原液测序问题
已经有7人回复
- 土壤中含有农药，提取的土壤DNA进行PCR扩增，农药会抑制PCR反应吗
已经有5人回复
- 和touchdownPCR有关的
已经有5人回复
- 【求助/交流】细菌16SDNA的通用引物
已经有12人回复
- 【求助/交流】问下细菌固定的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】土壤细菌TD-PCR二聚体如何消除[附图]
已经有3人回复
- 【求助/交流】土壤放线菌的多样性怎么做？
已经有7人回复
- 【求助/交流】细菌V3区PCR出现问题，引物为357和518，用于DGGE！
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于降落pcr的问题！
已经有4人回复
- 【求助/交流】PCR 总是没P出来
已经有21人回复
waldenpond
金虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 53.4
- 散金: 2167
- 红花: 14
- 帖子: 2608
- 在线: 154.3小时
- 虫号: 986777
- 注册: 2010-04-01
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
你是不是也参考的这篇文章？ Yu, Z. and M. Morrison (2004). "Comparisons of different hypervariable regions of rrs genes for use in fingerprinting of microbial communities by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis." Appl Environ Microbiol 70(8): 4800-4806. 我用touchdown跑出的条带也有问题：条带不够亮而且出现非特异性条带。 不知道还要不要继续用touchdown。 |
8楼2012-07-06 17:22:17
2楼2010-09-28 17:06:31
superadeel
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 89
- 散金: 11
- 红花: 1
- 帖子: 46
- 在线: 14.6小时
- 虫号: 1088404
- 注册: 2010-09-03
- 专业: 环境微生物学
3楼2010-09-28 20:20:43
xiadongliang
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 64 (初中生)
- 金币: 973.3
- 散金: 1299
- 红花: 15
- 帖子: 759
- 在线: 361.7小时
- 虫号: 433819
- 注册: 2007-08-18
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2010-09-29 11:10:30
