24小时热门版块排行榜    

查看: 2515  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

superadeel

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】土壤细菌多样性,引物F357GC R518 PCR老是出问题,求救! 已有6人参与

做土壤细菌多样性时,提的DNA用F357-GC和R518跑PCR ,能扩出来,但是条带很宽,很模糊,后续DGGE切胶,也是P出来很模糊,测序测不出来。

请问哪位大侠做过,经验分享一下,不胜感激。按理来说这个应该很容易做出来,不知道到我这里出了什么问题。

25ul体系:mix  12.5ul, 引物(10UM)各0.5uL,水10.5ul,模板1uL。(用Takara Ex tap 酶体系也做过)

程序:用touchdown,94度6分钟,94度1分钟,65-55度45秒(一循环降0.5度),72度45秒,20循环。后15个循环是94度1分钟,55度45秒,72度45秒。最后延伸10分钟。

[ Last edited by superadeel on 2010-9-28 at 16:58 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

土壤微生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superadeel

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by tsq0126 at 2010-09-28 17:06:31:
急切看到回复,我也是遇到相同的问题,哪位做过的仁兄给点建议和意见

你是哪里的?
3楼2010-09-28 20:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

tsq0126

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
急切看到回复,我也是遇到相同的问题,哪位做过的仁兄给点建议和意见
2楼2010-09-28 17:06:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流


扩增出这样的产物就可以做DGGE了。再试试,DNA多加一些,用2 uL。
4楼2010-09-29 11:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superadeel

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2010-09-29 11:10:30:


扩增出这样的产物就可以做DGGE了。再试试,DNA多加一些,用2 uL。

能不能告诉我,你土壤DNA是试剂盒提的还是手提,用的MIX还是别的什么,程序是怎么样的,大侠希望你帮帮忙,我做了一个多月了,老是跑出来很宽很模糊的条带,不知道你能不能说具体点,   关于多加点DNA,我试过,效果不是很好!  期待回复!!
5楼2010-09-29 12:03:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见