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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[交流] 【问题反馈】质粒双酶切切下120bp每次都看不到?已有18人参与

质粒6800bp,双酶切后切下120bp,每次跑电泳都看不到120的条带。另外一条大的条带很亮,是不是没有切开呢,反正用于下步连接也不出结果,不吝赐教!
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢回复~ 2010-09-15 09:41:54
应该是量太小了,给你计算了下,小片段120 bp,要看到的话,至少要20 ng(相当于5uL maker中弱带的亮度),酶切时6800 bp的大片段和120 bp的小片段摩尔数是一样的,这样的话,计算下来,你想看到120 bp的小片段,至少要切1.2 ug以上的载体,这个量需求还是比较大的。
Thank-you,so-blue.
7楼2010-09-15 09:37:22
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zdmei

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
电泳点个质粒作对照,闭合环状的质粒和切开的是有差别
9楼2010-09-15 12:54:23
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zplipeng

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
对,应该是量太少了,可以找找其他酶切位点,把片段切的长一点。或者加大质粒的量,或者做pcR验证,同时加上没有目的条带的质粒做阴性对照。。。
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
5楼2010-09-15 09:06:15
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普通回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流,欢迎常来~ 2010-09-15 00:07:18
是不是胶太短了,6800:120,估计你的120的都跑到缓冲液里了
最好上个图看看
2楼2010-09-14 23:27:01
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

应该没有,marker100bp还可以看的到的。我认为就是量太小了,所以看不到120bp的条带。
3楼2010-09-15 08:55:15
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zhaohui-eric

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-09-15 08:55:15:
应该没有,marker100bp还可以看的到的。我认为就是量太小了,所以看不到120bp的条带。

这个可能行比较大
4楼2010-09-15 08:59:43
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lu_zl

银虫 (小有名气)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-09-15 09:42:10
EB的发光强度与片段大小是成正比的。片段越大,插入的EB越多,越容易观察到。同样mol的小片段当然就看不到。所以加大质粒的量,顺便加大酶量,延长酶切时间,都可以改善。
6楼2010-09-15 09:35:11
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sfxt001

木虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-09-15 09:37:22:
应该是量太小了,给你计算了下,小片段120 bp,要看到的话,至少要20 ng(相当于5uL maker中弱带的亮度),酶切时6800 bp的大片段和120 bp的小片段摩尔数是一样的,这样的话,计算下来,你想看到120 bp的小片段, ...

这个正解
8楼2010-09-15 10:58:10
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feiye2214

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zdmei at 2010-09-15 12:54:23:
电泳点个质粒作对照,闭合环状的质粒和切开的是有差别

说的也是
10楼2010-09-15 13:50:34
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