【问题反馈】质粒双酶切切下120bp每次都看不到？ - 分子生物 - 综合其他

11楼2010-09-15 14:34:25

tj_fjl

新虫 (初入文坛)

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120BP怎么看得到，你要切多少质粒才行啊！

12楼2010-09-16 09:25:22

wwdxx2004

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Originally posted by zdmei at 2010-09-15 12:54:23:
电泳点个质粒作对照，闭合环状的质粒和切开的是有差别

这个方法好，应该还是有区别的，跑个胶看看

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13楼2010-09-16 14:49:29

jia1012428

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学习学习！！！

14楼2010-09-16 20:23:45

雪山飞狐7233

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叫应该用2.0%的，marker用DL500，一般10ul体系，切5ul，肯定能看到。

梦在路就在！

15楼2010-09-16 20:40:21

Silencess

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我之前想切一个55BP的片段也是死活检测不到。后来直接去测序了，，还好片断没有错。。。

繁花似錦，年華散盡。

16楼2010-09-16 20:58:58

stephenreal

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引用回帖:

Originally posted by wwdxx2004 at 2010-09-14 23:23:43:
质粒6800bp,双酶切后切下120bp,每次跑电泳都看不到120的条带。另外一条大的条带很亮，是不是没有切开呢，反正用于下步连接也不出结果，不吝赐教！

跑胶时不要加EB，跑完（注意无EB时，时间大约缩短1/3）后，胶浸泡在EB染液中染色，详见分子克隆的附录，量少、分子量小的也很清楚。

17楼2010-09-16 21:13:06

zhangxn2010

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引用回帖:

Originally posted by zdmei at 2010-09-15 12:54:23:
电泳点个质粒作对照，闭合环状的质粒和切开的是有差别

不过他是双切，万一只进行了单切就看不出来了，总之还是切下的片段太小

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一直向前！

18楼2010-09-17 10:19:37

最爱花诗雨

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穷鬼

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lstt09nk(金币+1):鼓励交流~~ 2010-09-17 16:30:59

用低浓度的胶跑电泳，时间缩短，时间长容易跑出来;
双酶切，三个小时；
空质粒跑一个孔做对照。最后不行的话，
换个酶切

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严于律己，宽以待人

19楼2010-09-17 10:34:32

wwdxx2004

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已经连上啦，说明之前的切开了，只是没有看到，谢谢大家的回复。

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20楼2010-09-18 11:33:56