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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【问题反馈】质粒双酶切切下120bp每次都看不到？
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fisherdr

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
学习了。正准备开始做。
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11楼2010-09-15 14:34:25
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tj_fjl

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
120BP怎么看得到，你要切多少质粒才行啊！
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12楼2010-09-16 09:25:22
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zdmei at 2010-09-15 12:54:23:
电泳点个质粒作对照，闭合环状的质粒和切开的是有差别

这个方法好，应该还是有区别的，跑个胶看看
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13楼2010-09-16 14:49:29
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
学习学习！！！
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14楼2010-09-16 20:23:45
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
叫应该用2.0%的，marker用DL500，一般10ul体系，切5ul，肯定能看到。
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梦在路就在！
15楼2010-09-16 20:40:21
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Silencess

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我之前想切一个55BP的片段也是死活检测不到。后来直接去测序了，，还好片断没有错。。。
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繁花似錦，年華散盡。
16楼2010-09-16 20:58:58
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stephenreal

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wwdxx2004 at 2010-09-14 23:23:43:
质粒6800bp,双酶切后切下120bp,每次跑电泳都看不到120的条带。另外一条大的条带很亮，是不是没有切开呢，反正用于下步连接也不出结果，不吝赐教！

跑胶时不要加EB，跑完（注意无EB时，时间大约缩短1/3）后，胶浸泡在EB染液中染色，详见分子克隆的附录，量少、分子量小的也很清楚。
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17楼2010-09-16 21:13:06
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
引用回帖:
Originally posted by zdmei at 2010-09-15 12:54:23:
电泳点个质粒作对照，闭合环状的质粒和切开的是有差别

不过他是双切，万一只进行了单切就看不出来了，总之还是切下的片段太小
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一直向前！
18楼2010-09-17 10:19:37
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~~ 2010-09-17 16:30:59
用低浓度的胶跑电泳，时间缩短，时间长 容易跑出来;
双酶切，三个小时；
空质粒跑一个孔做对照。最后不行的话，
换个酶切
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严于律己，宽以待人
19楼2010-09-17 10:34:32
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
已经连上啦，说明之前的切开了，只是没有看到，谢谢大家的回复。
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20楼2010-09-18 11:33:56
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