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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒转不进农杆菌
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tianhang

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒转不进农杆菌已有7人参与

已经做了几次农杆菌感受态了，可是还是转不进去质粒。每次涂完板都长的很少的菌落，鉴定后也没有目的带。有时候有目的带摇起来的菌液有没有目的带。好不容易菌液有条带，保种之后再摇就又没有了。太折磨人了！哪位大侠能帮帮小弟，感激不尽啊~有没有比较好农杆菌感受态制备方法，是发根农杆菌~
谢谢啦
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1楼2010-08-09 17:39:05
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tianhang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 周_yan at 2010-08-12 09:37:13:


我原来设计的引物包含5‘端一些非编码区即在起始密码子之前20多个碱基处开始设计的；后来就直接在起始密码子前设计了，考虑这一段非编码区可能会有影响。不知你的引物是如何设计的？

我的引物是直接从起始密码子前面设计的，加上酶切位点，估计没什么可改动的地方了~还是谢谢你
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8楼2010-08-12 10:35:50
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chengao001

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒丢失？我做转化时感觉挺好转的啊，平板上张得转化子少，但是基本上都是需要的。
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2楼2010-08-09 20:31:39
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周_yan

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我前段时间也遇到了同样的问题，总是筛不出带来，感觉总是转不进去；后来我又重新设计了一个引物与原来的不同的引物再筛就行了，发现前面筛的那些都是。可能的原因是转入农杆菌之后原来的引物序列丢失了或者有特殊结构使其不能配对。你可以试一试这个方法。
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3楼2010-08-10 10:56:09
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tianhang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 周_yan at 2010-08-10 10:56:09:
我前段时间也遇到了同样的问题，总是筛不出带来，感觉总是转不进去；后来我又重新设计了一个引物与原来的不同的引物再筛就行了，发现前面筛的那些都是。可能的原因是转入农杆菌之后原来的引物序列丢失了或者有特殊 ...

那么说可能是引物的问题？引物在检测质粒的时候好用，但是由于质粒进入农杆菌后会产生变化？然后引物就不好用了么？请问你后来重新设计的引物与原来的有什么不同？需要在哪些地方改进？谢谢你的帮助哈~祝你试验成功~
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4楼2010-08-12 08:29:40
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