24小时热门版块排行榜

返回列表

完了

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 83.3
帖子: 71
在线: 13.4小时
虫号: 1033216

[交流] 【求助/交流】我做转基因,如何把质粒转入农杆菌中?

自己有农杆菌菌株,向外单位要了基因.还是签了协议的.
别人给我们的基因应该是质粒形态的还是整合在大肠杆菌里的?应该不会是简单的双链DNA吧,我想的话.

如果是整合在大肠杆菌里的,我该怎么把基因弄到农杆菌中去?
如果是质粒形态的,我该怎么把基因弄到农杆菌里面去?

我需要技术路线,和注意事项.....谢谢....具体实验操作可以网上搜索.
谢谢.

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

氯霉素抗性的质粒转入氯霉素抗性的宿主菌，请问如何鉴定是否成功转入！？已经有9人回复
如何把质粒转入大肠杆菌中？已经有13人回复
关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题已经有14人回复
我的转基因啊。。都半年了。。求助过表达已经有11人回复
农杆菌介导的水稻转基因农杆菌的选择问题已经有24人回复
关于用农杆菌侵染法获得转基因植物的几点问题已经有17人回复
质粒pCAMBIA1300转入农杆菌EHA105中的问题？已经有7人回复
如何提取农杆菌质粒已经有11人回复
【求助/交流】我是新手，请问T-DNA与RNAi的原理已经有6人回复
【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒已经有11人回复
【求助/交流】质粒转不进农杆菌已经有13人回复
【求助/交流】急急急急！农杆菌培养温度超过30度，质粒就会丢失吗已经有5人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-01-14 13:00:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)

应助: 18 (小学生)
贵宾: 0.003
金币: 5847.6
帖子: 952
在线: 116.9小时
虫号: 709538

★ ★ ★
完了(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):很详细啊，鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-14 14:18:35

一般应该都是质粒吧，但是要看目的基因所在的质粒是什么质粒。如果是已经构建好的双元载体，那直接摇起来，提了质粒，转到农杆菌里就行
要是只是一般的克隆用的大肠的质粒，那要提了质粒，把目的基因切下来或者P下来，然后连到双元载体上，转化大肠，挑克隆提质粒验证正确之后再转到农杆菌里
如果确实目的基因是在菌的染色体上，那就得先P，连克隆载体，再做亚克隆到双元载体上转化农杆菌。
具体哪种情况问问那个外单位，肯定是知道的。
至于质粒转化农杆菌，原理没什么特别的，和转大肠一样，只不过制备感受态的溶液氯化钙浓度不太一样，要低一些。另外就是大肠是冰浴、42热激，农杆菌是液氮冷冻，37热激。另外复苏、培养时间什么的也要延长

赞一下(3人)

回复此楼

2楼2011-01-14 13:39:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

完了

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 83.3
帖子: 71
在线: 13.4小时
虫号: 1033216

引用回帖:

Originally posted by ben1147 at 2011-01-14 13:39:45:
一般应该都是质粒吧，但是要看目的基因所在的质粒是什么质粒。如果是已经构建好的双元载体，那直接摇起来，提了质粒，转到农杆菌里就行
要是只是一般的克隆用的大肠的质粒，那要提了质粒，把目的基因切下来或者P ...

如果只是一般的克隆用的大肠的质粒,那我还需要索要一个双元载体吧?否则就要自己构建一个双元载体?

赞一下

回复此楼

3楼2011-01-14 15:27:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖