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[交流]
【求助/交流】我做转基因,如何把质粒转入农杆菌中?
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自己有农杆菌菌株,向外单位要了基因.还是签了协议的. 别人给我们的基因应该是质粒形态的还是整合在大肠杆菌里的?应该不会是简单的双链DNA吧,我想的话. 如果是整合在大肠杆菌里的,我该怎么把基因弄到农杆菌中去? 如果是质粒形态的,我该怎么把基因弄到农杆菌里面去? 我需要技术路线,和注意事项.....谢谢....具体实验操作可以网上搜索. 谢谢. |
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完了(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):很详细啊，鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-14 14:18:35
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一般应该都是质粒吧，但是要看目的基因所在的质粒是什么质粒。如果是已经构建好的双元载体，那直接摇起来，提了质粒，转到农杆菌里就行 要是只是一般的克隆用的大肠的质粒，那要提了质粒，把目的基因切下来或者P下来，然后连到双元载体上，转化大肠，挑克隆提质粒验证正确之后再转到农杆菌里 如果确实目的基因是在菌的染色体上，那就得先P，连克隆载体，再做亚克隆到双元载体上转化农杆菌。 具体哪种情况问问那个外单位，肯定是知道的。 至于质粒转化农杆菌，原理没什么特别的，和转大肠一样，只不过制备感受态的溶液氯化钙浓度不太一样，要低一些。另外就是大肠是冰浴、42热激，农杆菌是液氮冷冻，37热激。另外复苏、培养时间什么的也要延长 |
2楼2011-01-14 13:39:45
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