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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 我的转基因啊。。都半年了。。求助过表达
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love三人游

新虫 (初入文坛)

[求助] 我的转基因啊。。都半年了。。求助过表达

我做这个载体都半年了，还没结果，好不容易有结果了吧，还有突变。现在有四处突变，但是只有一处有氨基酸变化。这个没事吧，可以用作过表达吗？EXtaq怎么这么不给力啊。。。
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1楼 2012-02-13 13:46:57
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你做的什么蛋白，一个氨基酸突变对蛋白活性影响不好说，得看突变成什么氨基酸，再有建议你用pfu或者pyr聚合酶，这两个是高保真的。
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2楼2012-02-13 15:45:34
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2, 专家考核): 实验要一步一步来，楼主悬了…… 2012-02-14 16:23:42
，表达基因之前就不测序看下么，都突变了......氨基酸哪怕突变一个都不行。即便是氨基酸没有突变，也要看同义突变是不是突变成了稀有密码子，会不会对表达有影响。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2012-02-13 16:41:18
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
采用定点突变的方法把他给变回来不就得了，很简单的~~~
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4楼2012-02-13 16:48:11
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love三人游

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-13 16:41:18:
，表达基因之前就不测序看下么，都突变了......氨基酸哪怕突变一个都不行。即便是氨基酸没有突变，也要看同义突变是不是突变成了稀有密码子，会不会对表达有影响。

同义突变是不是突变成了稀有密码子？？这句话是什么意思啊？
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5楼2012-02-13 20:19:00
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love三人游

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-02-13 16:48:11:
采用定点突变的方法把他给变回来不就得了，很简单的~~~

厄。。说的好简单吧。应该不会吧
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6楼2012-02-13 20:19:20
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用高保真酶p出自己的片段啦 。。。。还要测序检查
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7楼2012-02-13 20:20:09
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

西瓜(金币+2): 鼓励应助 2012-02-14 16:24:15
引用回帖:
6楼: Originally posted by love三人游 at 2012-02-13 20:19:20:
厄。。说的好简单吧。应该不会吧

是把一个基因连在质粒上吧？设计一对引物，引物中间包含你要突变的点，上下游引物完全互补，然后把整个质粒p下来，用DpnI酶将模板质粒消化掉将PCR产物直接转化就可以了。如果基因是在质粒上就是很简单啊~~~~
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8楼2012-02-14 09:23:49
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gandalf886

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
love三人游(金币+2): 2012-02-14 17:58:52
extaq是非常不靠谱的
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9楼2012-02-14 16:07:38
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
你就表达一下试试吧，反正又不是很麻烦，说不还会有好的结果呢
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10楼2012-02-14 21:26:53
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