24小时热门版块排行榜    

查看: 2335  |  回复: 11

love三人游

新虫 (初入文坛)

[求助] 我的转基因啊。。都半年了。。求助过表达

我做这个载体都半年了,还没结果,好不容易有结果了吧,还有突变。现在有四处突变,但是只有一处有氨基酸变化。这个没事吧,可以用作过表达吗?EXtaq怎么这么不给力啊。。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你做的什么蛋白,一个氨基酸突变对蛋白活性影响不好说,得看突变成什么氨基酸,再有建议你用pfu或者pyr聚合酶,这两个是高保真的。
2楼2012-02-13 15:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2, 专家考核): 实验要一步一步来,楼主悬了…… 2012-02-14 16:23:42
,表达基因之前就不测序看下么,都突变了......氨基酸哪怕突变一个都不行。即便是氨基酸没有突变,也要看同义突变是不是突变成了稀有密码子,会不会对表达有影响。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2012-02-13 16:41:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
采用定点突变的方法把他给变回来不就得了,很简单的~~~
4楼2012-02-13 16:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love三人游

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by brightfuture01 at 2012-02-13 16:41:18:
,表达基因之前就不测序看下么,都突变了......氨基酸哪怕突变一个都不行。即便是氨基酸没有突变,也要看同义突变是不是突变成了稀有密码子,会不会对表达有影响。

同义突变是不是突变成了稀有密码子??这句话是什么意思啊?
5楼2012-02-13 20:19:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love三人游

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by hyacinth326 at 2012-02-13 16:48:11:
采用定点突变的方法把他给变回来不就得了,很简单的~~~

厄。。说的好简单吧。应该不会吧
6楼2012-02-13 20:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用高保真酶p出自己的片段啦 。。。。还要测序检查
7楼2012-02-13 20:20:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

西瓜(金币+2): 鼓励应助 2012-02-14 16:24:15
引用回帖:
6楼: Originally posted by love三人游 at 2012-02-13 20:19:20:
厄。。说的好简单吧。应该不会吧

是把一个基因连在质粒上吧?设计一对引物,引物中间包含你要突变的点,上下游引物完全互补,然后把整个质粒p下来,用DpnI酶将模板质粒消化掉将PCR产物直接转化就可以了。如果基因是在质粒上就是很简单啊~~~~
8楼2012-02-14 09:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
love三人游(金币+2): 2012-02-14 17:58:52
extaq是非常不靠谱的
9楼2012-02-14 16:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

你就表达一下试试吧,反正又不是很麻烦,说不还会有好的结果呢
10楼2012-02-14 21:26:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 love三人游 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +4 Liwangman 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:01 by wang_dand
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 328,0703考生求调剂,一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
信息提示
请填处理意见