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gendanz

银虫 (初入文坛)

[求助] 转基因检测结果不稳定,有时有,有时没有,求高人解释

近期在做转基因检测,但老出现上午能pCR出来目的带的样品,下午再做就P不出来的情况,恳请有经验的虫友指点迷津!
第一张为上午做的PCR,水没有,阴性没有目的带,阳性有带
第二张为下午将有带的两个样品挑出来,做了个浓度梯度,结果没有P出目的带
用的是宝生物的mix。





[ Last edited by gendanz on 2011-11-24 at 22:09 ]
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颐香满园
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回帖置顶 ( 共有1个 )

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
silicare(金币+4, BioEPI+1): 欢迎回来 2011-11-26 10:27:39
gendanz(金币+2): 感谢您的热心回复,PCR确实误差太大,准备做杂交,但我很想知道到底为什么?呵呵 2011-11-27 17:33:44
你用的是什么材料?要是转基因植物(用农杆菌侵染的)可能是有假阳性的情况。做个southern看看吧,PCR这东西误差太大
2楼2011-11-25 00:41:11
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普通回帖

yqlmshui

禁虫 (小有名气)

gendanz(金币+2): 谢谢您的解答,您说的情况我都遇到过,嵌合体也考虑过,看来转基因PCR检测时有时无这个问题很难有个合理的解释,我准备做杂交了。 2011-11-27 17:36:48
本帖内容被屏蔽

3楼2011-11-25 10:02:04
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gendanz

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yqlmshui at 2011-11-25 10:02:04:
得到暂定的转化植株,GUS,bar都为阳性,目的基因PCR也都有条带,T1代种植时却大部分GUS,bar都为阴性,PCR也扩不出来,有没有多这种情况?是嵌合体的原因吗?

嵌合体的原因也考虑了,我现在是上午能扩出的条带,不是很亮,但却确实是很明显,阳性有,阴性没有,下午把扩出的样品拿出来再做就一个也扩不出来了。
还有就是,几个月前检测有的植株,现在提了DNA,就又扩不出来了。太诡异了!
颐香满园
4楼2011-11-25 21:55:11
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gendanz

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 虫子火箭兵 at 2011-11-25 00:41:11:
你用的是什么材料?要是转基因植物(用农杆菌侵染的)可能是有假阳性的情况。做个southern看看吧,PCR这东西误差太大

我用的是杨树,基因枪转的,确实感觉PCR太不靠谱了,用宝生物的酶和用其他公司的酶P的结果很不一样。
颐香满园
5楼2011-11-25 22:00:05
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幸福的花

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gendanz at 2011-11-25 21:55:11:
嵌合体的原因也考虑了,我现在是上午能扩出的条带,不是很亮,但却确实是很明显,阳性有,阴性没有,下午把扩出的样品拿出来再做就一个也扩不出来了。
还有就是,几个月前检测有的植株,现在提了DNA,就又扩不出 ...

我也遇到了和你一样的问题,小苗时有带,但栽到地里成株期检测时就没带了。现在正在找原因呢。
6楼2012-04-26 11:10:41
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future28

新虫 (初入文坛)

我做的PCR更诡异,对照植株DNA没有P出来,水却P出相同大小的条带1
7楼2013-03-16 21:16:33
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