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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因检测结果不稳定，有时有，有时没有，求高人解释
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gendanz

银虫 (初入文坛)

[求助] 转基因检测结果不稳定，有时有，有时没有，求高人解释

近期在做转基因检测，但老出现上午能pCR出来目的带的样品，下午再做就P不出来的情况，恳请有经验的虫友指点迷津！
第一张为上午做的PCR，水没有，阴性没有目的带，阳性有带
第二张为下午将有带的两个样品挑出来，做了个浓度梯度，结果没有P出目的带
用的是宝生物的mix。





[ Last edited by gendanz on 2011-11-24 at 22:09 ]
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颐香满园
1楼 2011-11-24 22:07:16
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
silicare(金币+4, BioEPI+1): 欢迎回来 2011-11-26 10:27:39
gendanz(金币+2): 感谢您的热心回复，PCR确实误差太大，准备做杂交，但我很想知道到底为什么？呵呵 2011-11-27 17:33:44
你用的是什么材料？要是转基因植物（用农杆菌侵染的）可能是有假阳性的情况。做个southern看看吧，PCR这东西误差太大
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2楼2011-11-25 00:41:11
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普通回帖

yqlmshui

禁虫 (小有名气)
gendanz(金币+2): 谢谢您的解答，您说的情况我都遇到过，嵌合体也考虑过，看来转基因PCR检测时有时无这个问题很难有个合理的解释，我准备做杂交了。 2011-11-27 17:36:48
本帖内容被屏蔽
3楼2011-11-25 10:02:04
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gendanz

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yqlmshui at 2011-11-25 10:02:04:
得到暂定的转化植株，GUS，bar都为阳性，目的基因PCR也都有条带，T1代种植时却大部分GUS，bar都为阴性，PCR也扩不出来，有没有多这种情况？是嵌合体的原因吗？

嵌合体的原因也考虑了，我现在是上午能扩出的条带，不是很亮，但却确实是很明显，阳性有，阴性没有，下午把扩出的样品拿出来再做就一个也扩不出来了。
还有就是，几个月前检测有的植株，现在提了DNA，就又扩不出来了。太诡异了!
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颐香满园
4楼2011-11-25 21:55:11
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gendanz

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 虫子火箭兵 at 2011-11-25 00:41:11:
你用的是什么材料？要是转基因植物（用农杆菌侵染的）可能是有假阳性的情况。做个southern看看吧，PCR这东西误差太大

我用的是杨树，基因枪转的，确实感觉PCR太不靠谱了，用宝生物的酶和用其他公司的酶P的结果很不一样。
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颐香满园
5楼2011-11-25 22:00:05
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幸福的花

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gendanz at 2011-11-25 21:55:11:
嵌合体的原因也考虑了，我现在是上午能扩出的条带，不是很亮，但却确实是很明显，阳性有，阴性没有，下午把扩出的样品拿出来再做就一个也扩不出来了。
还有就是，几个月前检测有的植株，现在提了DNA，就又扩不出 ...

我也遇到了和你一样的问题，小苗时有带，但栽到地里成株期检测时就没带了。现在正在找原因呢。
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6楼2012-04-26 11:10:41
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future28

新虫 (初入文坛)
我做的PCR更诡异，对照植株DNA没有P出来，水却P出相同大小的条带1
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7楼2013-03-16 21:16:33
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