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love三人游

新虫 (初入文坛)

[求助] 我的转基因啊。。都半年了。。求助过表达

我做这个载体都半年了,还没结果,好不容易有结果了吧,还有突变。现在有四处突变,但是只有一处有氨基酸变化。这个没事吧,可以用作过表达吗?EXtaq怎么这么不给力啊。。。
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

西瓜(金币+2): 鼓励应助 2012-02-14 16:24:15
引用回帖:
6楼: Originally posted by love三人游 at 2012-02-13 20:19:20:
厄。。说的好简单吧。应该不会吧

是把一个基因连在质粒上吧?设计一对引物,引物中间包含你要突变的点,上下游引物完全互补,然后把整个质粒p下来,用DpnI酶将模板质粒消化掉将PCR产物直接转化就可以了。如果基因是在质粒上就是很简单啊~~~~
8楼2012-02-14 09:23:49
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你做的什么蛋白,一个氨基酸突变对蛋白活性影响不好说,得看突变成什么氨基酸,再有建议你用pfu或者pyr聚合酶,这两个是高保真的。
2楼2012-02-13 15:45:34
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2, 专家考核): 实验要一步一步来,楼主悬了…… 2012-02-14 16:23:42
,表达基因之前就不测序看下么,都突变了......氨基酸哪怕突变一个都不行。即便是氨基酸没有突变,也要看同义突变是不是突变成了稀有密码子,会不会对表达有影响。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2012-02-13 16:41:18
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
采用定点突变的方法把他给变回来不就得了,很简单的~~~
4楼2012-02-13 16:48:11
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