24小时热门版块排行榜    

查看: 2696  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

love三人游

新虫 (初入文坛)

[求助] 我的转基因啊。。都半年了。。求助过表达

我做这个载体都半年了,还没结果,好不容易有结果了吧,还有突变。现在有四处突变,但是只有一处有氨基酸变化。这个没事吧,可以用作过表达吗?EXtaq怎么这么不给力啊。。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

西瓜(金币+2): 鼓励应助 2012-02-14 16:24:15
引用回帖:
6楼: Originally posted by love三人游 at 2012-02-13 20:19:20:
厄。。说的好简单吧。应该不会吧

是把一个基因连在质粒上吧?设计一对引物,引物中间包含你要突变的点,上下游引物完全互补,然后把整个质粒p下来,用DpnI酶将模板质粒消化掉将PCR产物直接转化就可以了。如果基因是在质粒上就是很简单啊~~~~
8楼2012-02-14 09:23:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你做的什么蛋白,一个氨基酸突变对蛋白活性影响不好说,得看突变成什么氨基酸,再有建议你用pfu或者pyr聚合酶,这两个是高保真的。
2楼2012-02-13 15:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2, 专家考核): 实验要一步一步来,楼主悬了…… 2012-02-14 16:23:42
,表达基因之前就不测序看下么,都突变了......氨基酸哪怕突变一个都不行。即便是氨基酸没有突变,也要看同义突变是不是突变成了稀有密码子,会不会对表达有影响。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2012-02-13 16:41:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
采用定点突变的方法把他给变回来不就得了,很简单的~~~
4楼2012-02-13 16:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见