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amethyst967

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助:转基因植株鉴定的一些问题 已有2人参与

我做转基因大豆的,接了一个师姐的材料,现在是T4代,老板让我验证转基因植株,并且做基因表达分析。我要做southern和RT,这是老板指定的,为了southern可以少做一些,我想先通过PCR来筛出转基因植株,可是我手里只有师姐的论文,没有阳性质粒。
我用了师姐论文里的引物、体系、程序,所有的都按她的PCR条件,但是得不到和她一样的结果。
现在我不知道该怎么做了,她所转进去的基因是大豆的一个内源基因,她截了三段,分别是928bp、435bp和2380bp,她用928bp和435bp的片段构了干扰载体,2380bp的片段构了过表达载体。
师姐论文里没有序列,只有登录号和引物,我按照她的引物找出来的序列与她标注的数字差十几bp,我就隔开这十几bp去重新设计引物,但是还是PCR不出结果,请各位高手指点一下,谢谢~
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开开心心做自己~
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-23 08:58:46
你这样做不大对吧?既然是内源基因你不应该拿这个基因PCR产物来验证。设计引物时可以载体的一部分序列作为上游或下游引物。。。。

PS:PCR体系也可能存在问题。
2楼2010-10-23 08:44:08
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amethyst967

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2010-10-23 08:44:08:
你这样做不大对吧?既然是内源基因你不应该拿这个基因PCR产物来验证。设计引物时可以载体的一部分序列作为上游或下游引物。。。。

PS:PCR体系也可能存在问题。

师姐论文里是用35s里一段做上游,基因内部做下游设计引物,我后来设计的引物也是这样的。
开开心心做自己~
3楼2010-10-23 17:03:23
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