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yp90

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于PCR 已有6人参与

这两天在做16s,总是p不出来,用的基因组DNA,按说DNA提的质量应该没问题,下面是PCR后的图,目的条带大概1500bp,应该在从下往上第4个maker附近,模板用了1ul,5ul,10倍稀释,20倍稀释以及100倍稀释,都出不来,总是这种模模糊糊的状态,请高手支招吧,实在没辙了。
对了,试剂和引物应该都没问题(引物是地球人都用的,捎带退火温度也就没问题了,试剂别人用着没问题)。
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

yp90(金币+1): 2010-08-09 23:22:00
用的什么公司的酶?
2楼2010-08-09 08:49:01
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yp90

金虫 (正式写手)

promega 的taq 酶。
3楼2010-08-09 08:51:21
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ymzfeng

金虫 (小有名气)

yp90(金币+1): 2010-08-09 09:18:27
有对照不?阳性对照跑得出不了
不知你的体系和反应条件是怎样的
4楼2010-08-09 09:06:57
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

yp90(金币+1): 2010-08-09 09:18:35
引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-08-09 09:06:57:
有对照不?阳性对照跑得出不了
不知你的体系和反应条件是怎样的

是啊,怎么没见你的阳性对照呢?
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
5楼2010-08-09 09:12:02
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yp90

金虫 (正式写手)

阳性对照之前做过一次,没问题的。这次就没做。
6楼2010-08-09 09:19:06
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ymzfeng

金虫 (小有名气)

yp90(金币+1): 2010-08-09 11:43:21
引用回帖:
Originally posted by yp90 at 2010-08-09 09:19:06:
阳性对照之前做过一次,没问题的。这次就没做。

每次操作的手法和外界条件都不一样,还是要有对照好说明问题些
7楼2010-08-09 09:23:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

yp90(金币+1): 2010-08-10 22:47:16
这种情况第一个要怀疑酶活力下降,假设之前的引物什么的都好好的
试试启用一管新的酶看看有没有改善
8楼2010-08-10 00:01:57
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kimxu_nt

木虫 (著名写手)

yp90(金币+1): 2010-08-10 22:47:46
你那地球人都用的引物是那个公司合成的啊?别小看了引物吧,俺去年做一基因做S也出不来,后来换个公司合成引物就OK了。

PS,能将你的引物序列贴出来么?没准也有问题
9楼2010-08-10 05:49:08
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

yp90(金币+1): 2010-08-10 22:47:52
还是要一起做个阳性对照吧,要不不好说
10楼2010-08-10 08:50:28
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