应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接表达载体
121/2返回列表12下一页
查看: 1080  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

虫虫6527

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接表达载体 已有10人参与

我的目的片段连接表达载体，目的片段两端加了保护碱基，直接用PCR产物回收做双酶切，连接，可是一直连不上。有人建议我连到T载体上再切下来，再做连接。这样做效果好吗？还是有什么别的办法？请各位指教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-22 08:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-22 12:35:25
用T载体效果会好点，至少你知道你两端已经都被切开。
直接双酶切你并不知道酶切效果，而且和你的保护碱基设计有关
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-07-22 09:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-22 12:35:34
PCR产物直接回收做酶切与T载体酶切相比效果要差，建议lz还是用T载体比较保险。
赞一下(2人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-07-22 10:29:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-22 12:35:41
换一下酶切位点吧 我就没连T载体上，饿哦是直接切得，效果也挺好的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-07-22 10:34:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以不连T载体的，麻烦！我没连过！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-07-22 11:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-22 12:35:48
楼主的问题很可能有几个原因，一个是你的加保护碱基数不够，二是引物有可能合成错了。还有一个双酶切效率低。另外回收后的量要保证。连接体系比率也要正确
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-07-22 11:48:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个和酶切位点有关系 好切的酶可以不连T
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-07-22 14:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的两个酶Buffer都是共同的吗？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-07-23 20:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周_yan

木虫 (小有名气)
可能与你的保护碱基有关，也可能酶切位点有关，有的酶容易发生碱基化而导致切不开。
赞一下 回复此楼
9楼2010-07-26 11:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
说说是哪两个酶？厂家？以及保护碱基怎么设计的
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-07-26 11:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 虫虫6527 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭