| 查看: 2260 | 回复: 20 | |||
[交流]
【求助/交流】关于引物
|
|
现在，我有了载体，有了目的基因的片段。我的目的是为了把这段基因连到载体上让其表达。我想知道的是，我是否应该先大量制备这种载体和目的基因片段？ 如果是，那么，载体是要通过大量摇瓶培养导入载体的菌体然后裂解获得是吗？ 目的基因片段（外公司合成）是要经过PCR大量合成对吧？ 问题来了，这段基因片段引物问题，我已经有了酶切位点。这段引物上有多少要与目的基因片段重合？3‘端是不是要留有一部分不与目的片段重合？这段不重合的大约要多少BP？ 当我把重组子做好之后如何检验是否连接成功？ 没有诱导检测位点，IPTG什么的肯定不能用。用PCR应该也可以把？ 问题又来了，这时的PCR所用引物可以是前面扩增基因片段的引物吗？ 如果可以，那么再返回前面设计引物的阶段，我这个引物要与载体上片段重合多少BP？ 要有游离端吗？ 纠结了一晚上，依然百思不得其解，求高人指点迷津~~~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有52人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于引物设计的问题
已经有5人回复
- 寻找好心人，帮帮我，关于引物以及PCR的问题！
已经有7人回复
- 关于引物设计
已经有9人回复
- 关于341F和534R引物的
已经有7人回复
- 【求助】关于引物非特异性的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】求助~关于引物降解问题
已经有6人回复
- 关于单引物验证..
已经有5人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
人生已过半程，不惑之年渐近，回望来时路，满心皆是感恩。
+5/1840
-
福建农林大学材料工程学院高分子材料课题组招生
+1/83
-
天津理工大学国家杰青王铁课题组招收2026年博士研究生
+1/82
-
有没有在香港的虫友啊
+1/72
-
坐标广州，男征女，双向奔赴
+1/66
-
西北大学化学与材料科学学院博士招生（还有两个名额，3月30日截至）
+1/63
-
天津城建大学招收物理、化学或者生物调剂生一名，前往天津大学联合培养
+1/48
-
哈工大郑州高等研究院刘绍琴与查正宝教授课题组诚招合成生物学背景相关的优秀人才加盟
+1/32
-
西北工业大学光子学研究团队诚聘博士后！
+2/30
-
湖北工业大学 生命科学与健康学院 课题组招收2026级食品/生物方向硕士
+1/29
-
同济大学环境学院 肖倩特聘研究员课题组 招聘硕士/博士（长期有效）
+1/27
-
湖南大学微生物结构与功能实验室2026年计划招收博士研究生
+1/18
-
---大龄的未婚男找结婚女对象
+1/16
-
26年博士自荐
+1/14
-
北京某研究院生物化学与分子生物学相关专业申请考核制博士招生（春季）
+1/12
-
新加坡国立大学药学系化学生物学课题组招PhD
+1/11
-
青岛科技大学可持续高分子团队 考研招生
+1/6
-
26年申博自荐-计算机视觉
+1/5
-
“机械、材料”招生
+1/1
-
求日语机械调剂，一志愿长安大学专硕332
+1/1
2楼2010-11-09 11:12:40
3楼2010-11-09 11:21:47
4楼2010-11-09 15:42:10
5楼2010-11-09 15:42:49
6楼2010-11-09 16:09:40
7楼2010-11-09 16:44:22
8楼2010-11-09 17:55:06
9楼2010-11-09 18:13:45
10楼2010-11-10 08:47:56
11楼2010-11-11 15:55:15
12楼2010-11-11 15:59:33
13楼2010-11-11 16:01:46
14楼2010-11-11 16:03:40
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
魑魅-魍魉(金币+10):太感谢了，终于遇到一个懂这个方面的人了，非常感谢 2010-11-12 08:39:19
lstt09nk(金币+2):不错，欢迎常来生物版 2010-11-12 09:20:37
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
魑魅-魍魉(金币+10):太感谢了，终于遇到一个懂这个方面的人了，非常感谢 2010-11-12 08:39:19
lstt09nk(金币+2):不错，欢迎常来生物版 2010-11-12 09:20:37
|
我一般至少选取18个重合碱基（3’端要重合），前面从5‘端到重合位点可以加酶切位点等，据我们实验室某位博士说前面加100bp都可以PCR出来，所以不用担心。 TM值仅供参考，我一般手算，A或T算2，G或C算4，只算重合区域。 实验初期建立信心很重要，等做习惯了，PCR应该不会是困扰你的问题。 我的邮箱：zhangxn2010@yahoo.cn,欢迎探讨，祝实验顺利. |
15楼2010-11-11 23:57:14
16楼2010-11-12 10:39:47
17楼2010-11-12 10:59:45
18楼2010-11-12 12:34:20
19楼2010-11-12 13:15:19
20楼2010-11-12 13:16:10
21楼2010-11-15 10:49:26
