24小时热门版块排行榜    

查看: 3573  |  回复: 20
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

魑魅-魍魉

新虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】关于引物

现在,我有了载体,有了目的基因的片段。我的目的是为了把这段基因连到载体上让其表达。我想知道的是,我是否应该先大量制备这种载体和目的基因片段? 如果是,那么,载体是要通过大量摇瓶培养导入载体的菌体然后裂解获得是吗? 目的基因片段(外公司合成)是要经过PCR大量合成对吧?

问题来了,这段基因片段引物问题,我已经有了酶切位点。这段引物上有多少要与目的基因片段重合?3‘端是不是要留有一部分不与目的片段重合?这段不重合的大约要多少BP?

当我把重组子做好之后如何检验是否连接成功? 没有诱导检测位点,IPTG什么的肯定不能用。用PCR应该也可以把? 问题又来了,这时的PCR所用引物可以是前面扩增基因片段的引物吗? 如果可以,那么再返回前面设计引物的阶段,我这个引物要与载体上片段重合多少BP? 要有游离端吗?

纠结了一晚上,依然百思不得其解,求高人指点迷津~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魑魅-魍魉

新虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 最爱花诗雨 at 2010-11-12 10:59:45:
感觉没你想象的那么复杂,设计目的片段引物的时候根据载体加入酶切位点,PCR出来的片段是带有酶切位点,而后不就是酶切 连接吗?至于确定有没有成功,那得再设计在载体对应的酶切位点上游和下游的一段序列设计引物 ...

那我原来设计的这个引物上面拥有整合过质粒的部分位点,用这个只设计一次的引物不可以吗?
19楼2010-11-12 13:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主应该好好去看一下分子克隆指南
所有的问题都可以得到解答
2楼2010-11-09 11:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shan-sa

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997:编辑内容 2010-11-09 12:20
问问师兄师姐的哪个不知道

[ Last edited by dhd997 on 2010-11-9 at 12:20 ]
3楼2010-11-09 11:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魑魅-魍魉

新虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-09 11:12:40:
楼主应该好好去看一下分子克隆指南
所有的问题都可以得到解答

不知道这位朋友有没有看过,解释一下呗,分子克隆我看过了,没有寻着答案,我看的是零四年版本,不知这位兄台的是什么版本
4楼2010-11-09 15:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
信息提示
请填处理意见