[交流] 【求助/交流】关于引物

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-09 11:12:40:
楼主应该好好去看一下分子克隆指南
所有的问题都可以得到解答

Originally posted by shan-sa at 2010-11-09 11:21:47:
问问师兄师姐的哪个不知道

[ Last edited by dhd997 on 2010-11-9 at 12:20 ]

Originally posted by yixuanwin at 2010-11-09 16:09:40:
现在有种东西叫试剂盒。1  得到pcr产物 2 回收纯化pcr产物 3  用试剂盒连接   再然后你怎么转化 随你了。

Originally posted by gongeleven at 2010-11-09 16:44:22:
引物3’端不能不重合，重合起码15bp以上吧

Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-11-09 17:55:06:
你用的什么载体呀？T载体吗？我用过Promega的PGEMTeasy和TAKARA的TMD18、TMD19,是TA连接，我没管酶切位点，我设计引物时也没添加酶切位点，转化时需加IPTG和Xgal，连接上后的菌落是白色，不用酶切，直接用菌液PCR ...

Originally posted by zhangxn2010 at 2010-11-10 08:47:56:
OK，现在我在做大量喝LZ类似的实验，其实primer和模板有18bp的重合足够了，前面你随便加什么改造，包括各种酶切位点及保护碱基。
你的实验很简单，只是最普通的载体构建，首先得到足量的基因片段，做酶切回收，连 ...

Originally posted by 魑魅-魍魉 at 2010-11-11 16:03:40:



你好这位朋友，你的引物总长有多少BP？ TM值怎么计算的？ 3端是必须要加不匹配的保护位点吗？ 还有没有什么讲究？可否留个邮箱什么的我们细谈一下，我有好多地方不懂，想请教请教

Originally posted by yixuanwin at 2010-11-09 16:09:40:
现在有种东西叫试剂盒。1  得到pcr产物 2 回收纯化pcr产物 3  用试剂盒连接   再然后你怎么转化 随你了。

Originally posted by 最爱花诗雨 at 2010-11-12 10:59:45:
感觉没你想象的那么复杂，设计目的片段引物的时候根据载体加入酶切位点，PCR出来的片段是带有酶切位点，而后不就是酶切 连接吗？至于确定有没有成功，那得再设计在载体对应的酶切位点上游和下游的一段序列设计引物 ...

Originally posted by amilie030312 at 2010-11-12 12:34:20:
建议把分子克隆上下册放枕头边上，从第一页看起

Originally posted by 魑魅-魍魉 at 2010-11-11 15:59:33:


是吗？不是总长有个什么18bp到30几bp的限制吗？ 重合区太长这个限制不是就废掉了嘛