应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒载体 引物设计
41/1返回列表
查看: 1856  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ssyyll1019

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒载体 引物设计

大家好，最近刚接触蛋白重组表达，有很多不明白的地方想象各位前辈请教了，首先感谢各位前辈虫友的关注。

最近做旋毛虫的丝氨酸蛋白酶mRNA （GenBank: EU302800.1

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucc ... CR，连接表达载体pET -28a。
具体序列如下图，氨基酸翻译序列为23-962(红色下划线)之间。
问题在于pET -28a的几个多克隆位点在目的基因上并没有限制性酶切位点，pET -28a+质粒载体上的His-Tag 要保留，是不是目的基因的终止子也要有变化？可能要进行引物修饰设计，我对此不清楚，无从下手。

希望大家指点！帮我设计下引物，以及要注意些的原则。谢谢！！！


这是pET -28a+质粒载体的序列。


[ Last edited by ssyyll1019 on 2010-9-14 at 22:27 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-14 22:20:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwr

银虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-15 07:41:32
ssyyll1019(金币+1): 2010-09-15 09:21:09
PET28的多克隆位点前面也有his-tag位点
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-15 06:30:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jAnmee

银虫 (正式写手)
在终止码前面插入序列并且通过改变阅读框就可以废弃原有的终止码了，然后寻找后面的终止码。我也是接触不多，给你这点建议。。。
赞一下 回复此楼
国荣，家驹，MJ，为什么我喜欢的恩都死了。。。。
3楼2010-11-15 19:14:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天宇201266

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问 pET-28a(+)  质粒序列你是在NCBI中查的？如何在NCBI中查
赞一下 回复此楼
在路上。。。
4楼2015-06-30 16:24:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ssyyll1019 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +3 大火山小火山 2026-03-16 5/250 2026-03-16 16:54 by barlinike
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子！
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭