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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒载体 引物设计
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ssyyll1019

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒载体 引物设计

大家好，最近刚接触蛋白重组表达，有很多不明白的地方想象各位前辈请教了，首先感谢各位前辈虫友的关注。

最近做旋毛虫的丝氨酸蛋白酶mRNA （GenBank: EU302800.1

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucc ... CR，连接表达载体pET -28a。
具体序列如下图，氨基酸翻译序列为23-962(红色下划线)之间。
问题在于pET -28a的几个多克隆位点在目的基因上并没有限制性酶切位点，pET -28a+质粒载体上的His-Tag 要保留，是不是目的基因的终止子也要有变化？可能要进行引物修饰设计，我对此不清楚，无从下手。

希望大家指点！帮我设计下引物，以及要注意些的原则。谢谢！！！


这是pET -28a+质粒载体的序列。


[ Last edited by ssyyll1019 on 2010-9-14 at 22:27 ]
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1楼 2010-09-14 22:20:49
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zwr

银虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-15 07:41:32
ssyyll1019(金币+1): 2010-09-15 09:21:09
PET28的多克隆位点前面也有his-tag位点
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2楼2010-09-15 06:30:34
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jAnmee

银虫 (正式写手)
在终止码前面插入序列并且通过改变阅读框就可以废弃原有的终止码了，然后寻找后面的终止码。我也是接触不多，给你这点建议。。。
赞一下 回复此楼
国荣，家驹，MJ，为什么我喜欢的恩都死了。。。。
3楼2010-11-15 19:14:03
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天宇201266

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问 pET-28a(+)  质粒序列你是在NCBI中查的？如何在NCBI中查
赞一下 回复此楼
在路上。。。
4楼2015-06-30 16:24:53
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