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ssyyll1019铜虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】质粒载体 引物设计
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大家好，最近刚接触蛋白重组表达，有很多不明白的地方想象各位前辈请教了，首先感谢各位前辈虫友的关注。 最近做旋毛虫的丝氨酸蛋白酶mRNA （GenBank: EU302800.1 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucc ... CR，连接表达载体pET -28a。 具体序列如下图，氨基酸翻译序列为23-962(红色下划线)之间。 问题在于pET -28a的几个多克隆位点在目的基因上并没有限制性酶切位点，pET -28a+质粒载体上的His-Tag 要保留，是不是目的基因的终止子也要有变化？可能要进行引物修饰设计，我对此不清楚，无从下手。  希望大家指点！帮我设计下引物，以及要注意些的原则。谢谢！！！ 这是pET -28a+质粒载体的序列。  [ Last edited by ssyyll1019 on 2010-9-14 at 22:27 ] |
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2楼2010-09-15 06:30:34
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天宇201266
金虫 (正式写手)
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