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铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】想问问关于质粒载体扩增表达的问题已有2人参与

我拿到一个构建好的质粒克隆载体，外援片段是cDNA。想把它扩增后导入pET-32a里表达。请问：我如何设计引物，如何利用载体的克隆位点和加载酶切位点？应注意那些问题，尤其是设计引物的时候。谢谢~

1楼 2010-10-14 13:04:56

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木虫 (正式写手)

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lstt09nk(金币+1):感谢交流，欢迎常来 2010-10-14 18:22:02

现用引物设计软件设计好引物，在5‘端引入酶切位点，主要GC含量、退火温度、长度、回文结构。直接用酶切位点切下来，进行亚克隆

2楼2010-10-14 17:25:23

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新虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):鼓励新虫交流 2010-10-14 22:25:53

首先，你要用DNAMAN分析下你的基因里面有那些可以用的酶切位点，然后选择内切酶，建议用NEB的，可以利用载体带的酶切位点，要是不合适，可以自己加上酶切位点和保护碱基，然后用PRIMER设计引物，即可

3楼2010-10-14 21:28:34

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