应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】沉默载体连接
91/1返回列表
查看: 1141  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

2008102037

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】沉默载体连接 已有4人参与

求助各位达人：

在构建沉默载体的时候，要将反向重复臂的两个片段A和B及内含子酶切下来连到表达载体上，但现在怎么都连不上，不知道问题出在哪里，所用的酶是BamHI和KpnI，所用的两个载体是没有问题的，已做出来过。但现在却不行了，想问问各位可碰到过类似情况？怎么解决的？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-06 17:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
MM好像没有说明白啊~
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-08-06 18:11:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 好久不见你了 2010-08-07 00:15:18
切下来的片段再连回原来的载体看看能不能连上
看看是不是粘末端的问题
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-08-06 20:32:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008102037

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-06 18:11:34:
MM好像没有说明白啊~

(⊙o⊙)…  哪没明白？
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-06 21:22:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008102037

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-08-06 20:32:49:
切下来的片段再连回原来的载体看看能不能连上
看看是不是粘末端的问题

嗯，这倒是个办法，回去试试。多谢O(∩_∩)O~
赞一下 回复此楼
5楼2010-08-06 21:22:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by 2008102037 at 2010-08-06 21:22:25:




(⊙o⊙)…  哪没明白？

RNAi 怎么涉及到了内含子
赞一下 回复此楼
6楼2010-08-07 10:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-07 10:50:01:




RNAi 怎么涉及到了内含子

沉默载体正、反向臂之间插入一段无关序列（异源内含子为佳）有利于dsRNA的形成，提高沉默效率
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-08-07 11:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-09 08:45:55
哦，是shRNA啊，那就是普通的酶切连接，是怎么个没连上，自连还是没有克隆

ps：那就是个颈环结构，不叫内含子。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2010-08-09 08:35:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个可能是酶切位点出了问题
也可逐一检查下，看你原来的载体是否切开了
若载体都没切开，当然连接不上
这种RNA干扰载体是不是设计四个酶切位点要方便些
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-08-09 09:02:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2008102037 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭