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听雪看山木虫 (职业作家)
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【求助/交流】单酶切载体竟然没切开，寻求原因？？ 已有5人参与
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我用的载体是5500bp，酶是XmaI，去过磷酸化的。这个酶切已经做过n多次了，插入基因就是没办法和载体连接上，自连现象严重。当时以为是去磷酸化步骤的问题，然后就做过2次去磷酸化。 后来在做完酶切后做了一个转化，将50ng酶切液用电子穿孔仪转入感受态细胞，隔夜培养后发现n多菌斑，那就是意味着没有酶切成功，心里这个郁闷啊！ 我用的这个酶据说是比较难反应的，所以当时酶切都是隔夜至少10个小时以上了！！ 我现在真的是一点办法也没有了，本来就是新手，第一次做，竟然还碰到这么大的问题，3个月了，一点进展都没有，着急啊！ 恳请高手们给点建议，小虾米在这多谢了！！ |
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