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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】单酶切载体竟然没切开，寻求原因？？
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听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by wangjiasi at 2010-02-11 13:50:28:
体系不大，可以再大一些，然后加大酶量~
2ng？？太少了吧
酶切后可以跑电泳看看是否切开了，如果一点都没切开可能是甲基化的问题

2ng还少吗？这2ng已经出现胡多的载体自连，如果再多自连会更严重吧
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开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
11楼2010-02-11 16:36:56
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louyiceng

荣誉版主 (知名作家)

优秀版主
★
听雪看山(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 听雪看山 at 2010-02-11 16:34:00:


老板怎么会轻易换呢，何况这个也没用完，人家其他人用都好着呢，就我这菜鸟的问题多！ 不过老板认为这个试剂公司的没很好啊！呜呜，再给个可行的办法噻

希望虫子帮一帮她
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12楼2010-05-05 08:34:11
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rosalie161

金虫 (正式写手)
★
听雪看山(金币+1):谢谢参与
还是SAP好！
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Rosalei.....
13楼2010-05-05 10:21:02
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
听雪看山(金币+1):谢谢参与
水不会有问题吧    是自己制的水还是随试剂带的DD水？
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14楼2010-05-05 10:56:01
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
听雪看山(金币+1):谢谢参与
顶住。不要急～
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15楼2010-05-05 11:09:49
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听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-05-05 11:09:49:
顶住。不要急～

谢谢，经过好几个月，酶切没有问题了。因为用的XmaI在说明里要酶切过夜（16小时）才有更强的效力，后来做出了阳性克隆。

现在问题在于，用了高保真的酶做PCR的，可是3次测序回来序列都不理想，第一次的有一个突变点，第二次和第三次序列里居然出现了内含子。
超郁闷，按理来说cDNA克隆，不应该有内含子的，可是出现了！！不只是必然还是偶然？？
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开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
16楼2010-05-05 17:41:06
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