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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Eco88l单酶切pUC18，失败原因及解决办法？？？？
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化-合-物1

金虫 (初入文坛)

[求助] Eco88l单酶切pUC18，失败原因及解决办法？？？？

根据pUC18质粒图谱，确定存在Eco88l酶切位点。想用pUC18单酶切后做载体。以前经常切成线状的，可是现在怎么也切不动了。跑胶完了还是原条带我现在都叫它“钢铁质粒”了，求问各位大侠们，这个咋办？
酶换过新的，质粒换过新的，缓冲液也换过，温度一直是37，
体系：ddH2o 16ul   
DNA 2ul
Buffer  2ul   
酶    1ul
其实一直在尝试不同的酶切体系，曾经这个体系成功过就写上来了。可是现在怎么做也切不开了。求求各位帮我指点一下，不胜感激！！！

酶切以后



酶切以前

[ Last edited by 化-合-物1 on 2011-11-7 at 21:10 ]
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1楼 2011-11-07 16:33:11
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化-合-物1

金虫 (初入文坛)
有没有人救救我啊？？？
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2楼2011-11-07 22:36:55
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖

确定酶酶与问题的基础上，找冻存的菌重新提取质粒，用水溶解/洗脱质粒。再试……
赞一下 回复此楼
金币是赌出来的
3楼2011-11-08 10:05:10
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化-合-物1

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wjswj at 2011-11-08 10:05:10:
确定酶酶与问题的基础上，找冻存的菌重新提取质粒，用水溶解/洗脱质粒。再试……

重新更换质粒，使用无菌水溶解还是不行。
赞一下 回复此楼
4楼2011-11-10 16:10:15
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麻花13

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

会不会是甲基化的问题？考虑重新转化在提质粒？
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5楼2011-11-21 08:04:00
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