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化-合-物1

金虫 (初入文坛)

[求助] Eco88l单酶切pUC18,失败原因及解决办法????

根据pUC18质粒图谱,确定存在Eco88l酶切位点。想用pUC18单酶切后做载体。以前经常切成线状的,可是现在怎么也切不动了。跑胶完了还是原条带我现在都叫它“钢铁质粒”了,求问各位大侠们,这个咋办?
酶换过新的,质粒换过新的,缓冲液也换过,温度一直是37,
体系:ddH2o 16ul   
DNA 2ul
Buffer  2ul   
酶    1ul
其实一直在尝试不同的酶切体系,曾经这个体系成功过就写上来了。可是现在怎么做也切不开了。求求各位帮我指点一下,不胜感激!!!

酶切以后



酶切以前

[ Last edited by 化-合-物1 on 2011-11-7 at 21:10 ]
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化-合-物1

金虫 (初入文坛)

有没有人救救我啊???
2楼2011-11-07 22:36:55
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖

确定酶酶与问题的基础上,找冻存的菌重新提取质粒,用水溶解/洗脱质粒。再试……
金币是赌出来的
3楼2011-11-08 10:05:10
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化-合-物1

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wjswj at 2011-11-08 10:05:10:
确定酶酶与问题的基础上,找冻存的菌重新提取质粒,用水溶解/洗脱质粒。再试……

重新更换质粒,使用无菌水溶解还是不行。
4楼2011-11-10 16:10:15
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麻花13

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

会不会是甲基化的问题?考虑重新转化在提质粒?
5楼2011-11-21 08:04:00
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