24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

应助: 3 (幼儿园)
贵宾: 1.037
金币: 2112.6
散金: 3557
红花: 43
沙发: 3
帖子: 3644
在线: 445.1小时
虫号: 509830
注册: 2008-02-23
性别: MM
专业: 植物营养学

[交流] 【求助/交流】单酶切载体竟然没切开，寻求原因？？已有5人参与

我用的载体是5500bp，酶是XmaI，去过磷酸化的。这个酶切已经做过n多次了，插入基因就是没办法和载体连接上，自连现象严重。当时以为是去磷酸化步骤的问题，然后就做过2次去磷酸化。
   后来在做完酶切后做了一个转化，将50ng酶切液用电子穿孔仪转入感受态细胞，隔夜培养后发现n多菌斑，那就是意味着没有酶切成功，心里这个郁闷啊！
   我用的这个酶据说是比较难反应的，所以当时酶切都是隔夜至少10个小时以上了！！

   我现在真的是一点办法也没有了，本来就是新手，第一次做，竟然还碰到这么大的问题，3个月了，一点进展都没有，着急啊！
   恳请高手们给点建议，小虾米在这多谢了！！

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有273人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。

1楼2010-02-08 20:19:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

应助: 3 (幼儿园)
贵宾: 1.037
金币: 2112.6
散金: 3557
红花: 43
沙发: 3
帖子: 3644
在线: 445.1小时
虫号: 509830
注册: 2008-02-23
性别: MM
专业: 植物营养学

在酶切完，纯化后，我做了转移，第二天看板子发现菌斑很多（估计500以上）。后来不甘心有做了去磷酸化，又做了次转移，二次发现还是很多菌斑但是明显少于未去磷酸化的板子。
这个能说明什么不？

下面是酶切凝胶回收的图，貌似不太好，不敢确定！！

左边是酶切的载体，右边是对照未酶切的载体

[ Last edited by 听雪看山 on 2010-2-11 at 16:23 ]