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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr条带一直弥散
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卖海盗

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr条带一直弥散 已有1人参与

做的是昆虫肠道细菌的pcr   每次pcr完条带都是非常弥散  体系： 总共50ul  加premix taq 25ul 、上下游引物各1ul （浓度10uM）8F 与926R  BSA 0.5ul  模版根据浓度加量 补无菌水至50ul   pcr过程：94度3min 94度30s 56度 45s  72度2min 循环35次  最后72度延伸3min   。退火温度从51-59度相差一度梯度试过  循环次数25 30 35 40 都试过  引物浓度也试过 2uM 8uM     模版量5 10 15 20 30 40ng都试过  还是弥散 差距只有弥散的程度大小和上下位置以及亮度  已经无能为力了 做了半年了 求大神指导  图片前四个是DNA电泳条带 后四个就是pcr后弥散的条带

pcr条带一直弥散


@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-07-21 21:13:17
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卖海盗

新虫 (初入文坛)
这体系师姐以前做出来过 现在我完全做不出来  换了引物也这样  换了其他公司的premix酶还是这样

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2楼2017-07-21 21:15:23
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-22 08:47:14
提高模板浓度，因为vector-borne 丰度很低
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3楼2017-07-22 01:13:50
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卖海盗

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-22 01:13:50
提高模板浓度，因为vector-borne 丰度很低

您好 请问vector-borne是什么 我是新手.. 谢谢  ！ 模版DNA 有的浓度有80ng/ul  有的只有5ng/ul 选哪个好呢

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4楼2017-07-22 08:44:15
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